中国药物与临床
中國藥物與臨床
중국약물여림상
CHINESE REMEDIES & CLINICS
2011年
11期
1265-1367
,共103页
张岚%李冰%郑晓汾%史静华
張嵐%李冰%鄭曉汾%史靜華
장람%리빙%정효분%사정화
干细胞%细胞培养技术%组织工程%上皮,角膜
榦細胞%細胞培養技術%組織工程%上皮,角膜
간세포%세포배양기술%조직공정%상피,각막
目的 以羊膜做载体将兔口腔黏膜上皮干细胞诱导为角膜上皮样细胞,探讨口腔黏膜上皮细胞作为种子细胞体外培养构建组织工程角膜的技术方法,为眼表重建提供材料.方法 用Ⅳ型胶原黏附法分离纯化口腔黏膜上皮干细胞,对体外培养的口腔黏膜干细胞进行免疫表型鉴定.将筛选后获得的口腔黏膜上皮干细胞种植在去上皮羊膜表面体外培养,待细胞融合成单层后置入插入式培养皿中进行气液界面培养,促进细胞分化形成复层.培养数日后进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学、光镜及透射电镜检测,观察羊膜-复层上皮组织结构,免疫荧光检测干细胞特异性标志物P63以及角膜上皮细胞标志物角蛋白3(K3)并与角膜上皮组织比较.结果 体外诱导培养数天后,羊膜载体的口腔黏膜上皮细胞形成复层,在组织形态及生物学特性上与角膜上皮相似.并且组织细胞P63、K3表达明显,角膜特异性生物学标志物免疫组织化学染色呈阳性.结论 在本实验的培养条件下,获得的口腔黏膜上皮干细胞可在体外培养扩增,呈克隆性生长,具有很强的增殖能力.口腔黏膜上皮干细胞体外培养可构建类角膜上皮.
目的 以羊膜做載體將兔口腔黏膜上皮榦細胞誘導為角膜上皮樣細胞,探討口腔黏膜上皮細胞作為種子細胞體外培養構建組織工程角膜的技術方法,為眼錶重建提供材料.方法 用Ⅳ型膠原黏附法分離純化口腔黏膜上皮榦細胞,對體外培養的口腔黏膜榦細胞進行免疫錶型鑒定.將篩選後穫得的口腔黏膜上皮榦細胞種植在去上皮羊膜錶麵體外培養,待細胞融閤成單層後置入插入式培養皿中進行氣液界麵培養,促進細胞分化形成複層.培養數日後進行囌木素-伊紅(HE)染色和免疫組織化學、光鏡及透射電鏡檢測,觀察羊膜-複層上皮組織結構,免疫熒光檢測榦細胞特異性標誌物P63以及角膜上皮細胞標誌物角蛋白3(K3)併與角膜上皮組織比較.結果 體外誘導培養數天後,羊膜載體的口腔黏膜上皮細胞形成複層,在組織形態及生物學特性上與角膜上皮相似.併且組織細胞P63、K3錶達明顯,角膜特異性生物學標誌物免疫組織化學染色呈暘性.結論 在本實驗的培養條件下,穫得的口腔黏膜上皮榦細胞可在體外培養擴增,呈剋隆性生長,具有很彊的增殖能力.口腔黏膜上皮榦細胞體外培養可構建類角膜上皮.
목적 이양막주재체장토구강점막상피간세포유도위각막상피양세포,탐토구강점막상피세포작위충자세포체외배양구건조직공정각막적기술방법,위안표중건제공재료.방법 용Ⅳ형효원점부법분리순화구강점막상피간세포,대체외배양적구강점막간세포진행면역표형감정.장사선후획득적구강점막상피간세포충식재거상피양막표면체외배양,대세포융합성단층후치입삽입식배양명중진행기액계면배양,촉진세포분화형성복층.배양수일후진행소목소-이홍(HE)염색화면역조직화학、광경급투사전경검측,관찰양막-복층상피조직결구,면역형광검측간세포특이성표지물P63이급각막상피세포표지물각단백3(K3)병여각막상피조직비교.결과 체외유도배양수천후,양막재체적구강점막상피세포형성복층,재조직형태급생물학특성상여각막상피상사.병차조직세포P63、K3표체명현,각막특이성생물학표지물면역조직화학염색정양성.결론 재본실험적배양조건하,획득적구강점막상피간세포가재체외배양확증,정극륭성생장,구유흔강적증식능력.구강점막상피간세포체외배양가구건류각막상피.
