CAJ | 학술논문

背景与目的:肿瘤细胞形成多细胞球后,对许多化疗药物的耐受性明显增强,这种现象被称为“多细胞耐药”.其发生机制可能与细胞黏附引起的信号通路活性的改变有关.细胞质膜微囊蛋白-1 (caveolin-1,CAV1)是一个细胞膜蛋白,在细胞膜信号通路的调节中发挥重要作用.本研究旨在探讨CAV1基因沉默是否能增强MCF-7多细胞球对多柔比星的敏感性,并初步探讨其机制.方法:用liquid overlay技术培养获得MCF-7多细胞球,用脂质体转染法把特异针对CAV1基因的双链小RNA干扰片段导入MCF-7细胞中,采用台盼蓝拒染法检测多柔比星对MCF-7的细胞抑制率,分别用RT-PCR和免疫印迹法检测CAV1 mRNA水平及蛋白水平,用免疫印迹法检测细胞总黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)及磷酸化FAK (p-FAK)蛋白水平.结果:与单层细胞相比,多细胞球组的多柔比星细胞抑制率明显降低,FAK相对磷酸化水平增加2.64倍(t=7.32,P＜0.01)；CAV1基因沉默后,MCF-7多细胞球生长缓慢,球体较松散,与未转染组相比,干扰组多细胞球多柔比星(1 μ mol/L)的细胞抑制率增加了1.07倍(t=5.77,P＜0.01),FAK相对磷酸化水平下降68.7％(t=6.57,P＜0.01).结论:多细胞球的形成可以增强MCF-7细胞对多柔比星的耐受性；CAV1基因沉默能逆转MCF-7多细胞球对多柔比星的耐药现象,FAK相对磷酸化水平的下调可能是其重要机制.
배경여목적:종류세포형성다세포구후,대허다화료약물적내수성명현증강,저충현상피칭위“다세포내약”.기발생궤제가능여세포점부인기적신호통로활성적개변유관.세포질막미낭단백-1 (caveolin-1,CAV1)시일개세포막단백,재세포막신호통로적조절중발휘중요작용.본연구지재탐토CAV1기인침묵시부능증강MCF-7다세포구대다유비성적민감성,병초보탐토기궤제.방법:용liquid overlay기술배양획득MCF-7다세포구,용지질체전염법파특이침대CAV1기인적쌍련소RNA간우편단도입MCF-7세포중,채용태반람거염법검측다유비성대MCF-7적세포억제솔,분별용RT-PCR화면역인적법검측CAV1 mRNA수평급단백수평,용면역인적법검측세포총점착반격매(focal adhesion kinase,FAK)급린산화FAK (p-FAK)단백수평.결과:여단층세포상비,다세포구조적다유비성세포억제솔명현강저,FAK상대린산화수평증가2.64배(t=7.32,P＜0.01)；CAV1기인침묵후,MCF-7다세포구생장완만,구체교송산,여미전염조상비,간우조다세포구다유비성(1 μ mol/L)적세포억제솔증가료1.07배(t=5.77,P＜0.01),FAK상대린산화수평하강68.7％(t=6.57,P＜0.01).결론:다세포구적형성가이증강MCF-7세포대다유비성적내수성；CAV1기인침묵능역전MCF-7다세포구대다유비성적내약현상,FAK상대린산화수평적하조가능시기중요궤제.