CAJ | 학술논문

目的:从人胰腺细胞cDNA文库中筛选出与丙型肝炎病毒(HCV)NS4A蛋白存在相关作用并且参与糖、脂类代谢过程的结合蛋白,为研究HCV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供实验依据.方法:构建pGBKT7-NS4A作为诱饵质粒,转化酵母菌株AH109,用SD/-Trp筛选阳性菌落.配合两种重组酵母菌株AH109与Y187(人胰腺细胞cDNA文库质粒转化),用四缺培养基及X-α-gal筛选蓝色酵母菌落,提取相应质粒,电转化感受态菌DH5α后再提取质粒,测序仪测序,结果使用PUMED进行序列比对.结果:用pGBKT7-HCV NS4A重组质粒作为诱饵,成功从人胰腺cDNA文库中筛选出5种与HCV NS4A蛋白相结合的蛋白基因,包括CDK5R1、弹性蛋白酶3A、胰脂肪酶、KRAS和胆盐刺激酯酶.结论:HCV NS4A蛋白与胰腺文库中的上述5种代谢相关蛋白存在相互作用,从而影响糖代谢过程.
목적:종인이선세포cDNA문고중사선출여병형간염병독(HCV)NS4A단백존재상관작용병차삼여당、지류대사과정적결합단백,위연구HCV영향당、지류대사적분자생물학궤제제공실험의거.방법:구건pGBKT7-NS4A작위유이질립,전화효모균주AH109,용SD/-Trp사선양성균락.배합량충중조효모균주AH109여Y187(인이선세포cDNA문고질립전화),용사결배양기급X-α-gal사선람색효모균락,제취상응질립,전전화감수태균DH5α후재제취질립,측서의측서,결과사용PUMED진행서렬비대.결과:용pGBKT7-HCV NS4A중조질립작위유이,성공종인이선cDNA문고중사선출5충여HCV NS4A단백상결합적단백기인,포괄CDK5R1、탄성단백매3A、이지방매、KRAS화담염자격지매.결론:HCV NS4A단백여이선문고중적상술5충대사상관단백존재상호작용,종이영향당대사과정.