军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2012年
11期
825-829
,共5页
孔祥祯%尹荣华%郑巍薇%詹轶群%杨晓明%李长燕
孔祥禎%尹榮華%鄭巍薇%詹軼群%楊曉明%李長燕
공상정%윤영화%정외미%첨질군%양효명%리장연
THAP11%RNA干扰%慢病毒%细胞系%人造血干细胞
THAP11%RNA榦擾%慢病毒%細胞繫%人造血榦細胞
THAP11%RNA간우%만병독%세포계%인조혈간세포
目的 构建人THAP11基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,制备高滴度病毒颗粒,敲低K562细胞和脐带血CD34+细胞中THAP11表达.方法 采用第三代慢病毒包装系统,将含有特异性干涉THAP11 的DNA序列克隆入穿梭质粒pSicoR中,构建siTHAP11-pSicoR质粒.在脂质体介导下,siTHAP11-pSicoR与包装质粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG 共转染HEK293T细胞,获得高滴度慢病毒颗粒.感染K562细胞,检测内源THAP11敲低效果.感染人CD34+细胞,流式分选GFP阳性细胞,检测原代细胞中THAP11的敲低效果.结果 成功构建针对THAP11两个位点的RNAi慢病毒载体siTHAP11-1和siTHAP11-2并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达1.8×108 TU/ml.感染K562细胞后建立稳定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下调.感染CD34+细胞效率达30%以上,siTHAP11-1可下调THAP11mRNA约80%,siTHAP11-2约下调85%.结论 成功构建THAP11的RNAi慢病毒载体,包装后的病毒颗粒可有效敲低细胞株及原代细胞中内源性THAP11的表达,为后续研究THAP11对CD34+细胞的影响奠定基础.
目的 構建人THAP11基因RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體,製備高滴度病毒顆粒,敲低K562細胞和臍帶血CD34+細胞中THAP11錶達.方法 採用第三代慢病毒包裝繫統,將含有特異性榦涉THAP11 的DNA序列剋隆入穿梭質粒pSicoR中,構建siTHAP11-pSicoR質粒.在脂質體介導下,siTHAP11-pSicoR與包裝質粒pLP1,pLP2,pLP/VSVG 共轉染HEK293T細胞,穫得高滴度慢病毒顆粒.感染K562細胞,檢測內源THAP11敲低效果.感染人CD34+細胞,流式分選GFP暘性細胞,檢測原代細胞中THAP11的敲低效果.結果 成功構建針對THAP11兩箇位點的RNAi慢病毒載體siTHAP11-1和siTHAP11-2併穫得慢病毒顆粒,病毒滴度檢測可達1.8×108 TU/ml.感染K562細胞後建立穩定株,THAP11的蛋白水平和mRNA水平均有下調.感染CD34+細胞效率達30%以上,siTHAP11-1可下調THAP11mRNA約80%,siTHAP11-2約下調85%.結論 成功構建THAP11的RNAi慢病毒載體,包裝後的病毒顆粒可有效敲低細胞株及原代細胞中內源性THAP11的錶達,為後續研究THAP11對CD34+細胞的影響奠定基礎.
목적 구건인THAP11기인RNA간우(RNAi)만병독재체,제비고적도병독과립,고저K562세포화제대혈CD34+세포중THAP11표체.방법 채용제삼대만병독포장계통,장함유특이성간섭THAP11 적DNA서렬극륭입천사질립pSicoR중,구건siTHAP11-pSicoR질립.재지질체개도하,siTHAP11-pSicoR여포장질립pLP1,pLP2,pLP/VSVG 공전염HEK293T세포,획득고적도만병독과립.감염K562세포,검측내원THAP11고저효과.감염인CD34+세포,류식분선GFP양성세포,검측원대세포중THAP11적고저효과.결과 성공구건침대THAP11량개위점적RNAi만병독재체siTHAP11-1화siTHAP11-2병획득만병독과립,병독적도검측가체1.8×108 TU/ml.감염K562세포후건립은정주,THAP11적단백수평화mRNA수평균유하조.감염CD34+세포효솔체30%이상,siTHAP11-1가하조THAP11mRNA약80%,siTHAP11-2약하조85%.결론 성공구건THAP11적RNAi만병독재체,포장후적병독과립가유효고저세포주급원대세포중내원성THAP11적표체,위후속연구THAP11대CD34+세포적영향전정기출.
