生理学报
生理學報
생이학보
ACTA PHYSIOLOGICA SINICA
2004年
3期
288-294
,共7页
陆德琴%李会革%叶红%叶仕桥%金肆%王迪浔
陸德琴%李會革%葉紅%葉仕橋%金肆%王迪潯
륙덕금%리회혁%협홍%협사교%금사%왕적심
组胺%一氧化氮合酶%基因表达%内皮细胞%肺动脉
組胺%一氧化氮閤酶%基因錶達%內皮細胞%肺動脈
조알%일양화담합매%기인표체%내피세포%폐동맥
本实验研究了组胺对原代培养的肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)基因表达的影响及分子机制.采用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测mRNA和蛋白质的表达水平,用荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6-kb的启动子活性,用硝酸还原酶法检测NO的产量.结果发现,组胺增强eNOS表达,呈浓度和时间依赖性,10μmol/L组胺处理肺动脉内皮细胞24 h可使eNOSmRNA和蛋白质的表达达到高峰,eNOSmRNA水平为正常对照组的160.8±12.2%(P＜0.05),蛋白质水平为正常对照组的136.2±11.2%(P＜0.05).特异性CaMK Ⅱ抑制剂KN-93可抑制组胺的这一效应,表明组胺可通过激活CaMK Ⅱ增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达.报告基因实验表明,10μmol/L组胺处理24 h后肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子的活性增强,为正常对照组的148.2±33.7%(P＜0.05).组胺可使肺动脉内皮细胞产生NO增加.这些结果表明组胺在转录水平增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达,并使细胞产生NO增加,这可能是组胺调节肺血管张力的机制之一.CaMK Ⅱ可能是组胺增强肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的途径之一.
本實驗研究瞭組胺對原代培養的肺動脈內皮細胞一氧化氮閤酶(nitric oxide synthase,NOS)基因錶達的影響及分子機製.採用RT-PCR和免疫印跡技術分彆檢測mRNA和蛋白質的錶達水平,用熒光素酶報告基因實驗檢測eNOS基因轉錄起始點上遊長1.6-kb的啟動子活性,用硝痠還原酶法檢測NO的產量.結果髮現,組胺增彊eNOS錶達,呈濃度和時間依賴性,10μmol/L組胺處理肺動脈內皮細胞24 h可使eNOSmRNA和蛋白質的錶達達到高峰,eNOSmRNA水平為正常對照組的160.8±12.2%(P＜0.05),蛋白質水平為正常對照組的136.2±11.2%(P＜0.05).特異性CaMK Ⅱ抑製劑KN-93可抑製組胺的這一效應,錶明組胺可通過激活CaMK Ⅱ增彊肺動脈內皮細胞eNOS基因的錶達.報告基因實驗錶明,10μmol/L組胺處理24 h後肺動脈內皮細胞eNOS基因啟動子的活性增彊,為正常對照組的148.2±33.7%(P＜0.05).組胺可使肺動脈內皮細胞產生NO增加.這些結果錶明組胺在轉錄水平增彊肺動脈內皮細胞eNOS基因的錶達,併使細胞產生NO增加,這可能是組胺調節肺血管張力的機製之一.CaMK Ⅱ可能是組胺增彊肺動脈內皮細胞eNOS基因錶達的途徑之一.
본실험연구료조알대원대배양적폐동맥내피세포일양화담합매(nitric oxide synthase,NOS)기인표체적영향급분자궤제.채용RT-PCR화면역인적기술분별검측mRNA화단백질적표체수평,용형광소매보고기인실험검측eNOS기인전록기시점상유장1.6-kb적계동자활성,용초산환원매법검측NO적산량.결과발현,조알증강eNOS표체,정농도화시간의뢰성,10μmol/L조알처리폐동맥내피세포24 h가사eNOSmRNA화단백질적표체체도고봉,eNOSmRNA수평위정상대조조적160.8±12.2%(P＜0.05),단백질수평위정상대조조적136.2±11.2%(P＜0.05).특이성CaMK Ⅱ억제제KN-93가억제조알적저일효응,표명조알가통과격활CaMK Ⅱ증강폐동맥내피세포eNOS기인적표체.보고기인실험표명,10μmol/L조알처리24 h후폐동맥내피세포eNOS기인계동자적활성증강,위정상대조조적148.2±33.7%(P＜0.05).조알가사폐동맥내피세포산생NO증가.저사결과표명조알재전록수평증강폐동맥내피세포eNOS기인적표체,병사세포산생NO증가,저가능시조알조절폐혈관장력적궤제지일.CaMK Ⅱ가능시조알증강폐동맥내피세포eNOS기인표체적도경지일.
