细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2004年
5期
556-559
,共4页
李利峰%罗文新%顾颖%朱子恒%王颖彬%张军%夏宁邵
李利峰%囉文新%顧穎%硃子恆%王穎彬%張軍%夏寧邵
리리봉%라문신%고영%주자항%왕영빈%장군%하저소
HEV%单链抗体%原核表达
HEV%單鏈抗體%原覈錶達
HEV%단련항체%원핵표체
目的: 降低HEV中和性单抗(mAb)13D8的鼠源性, 表达其单链抗体(scFv).方法: 从分泌13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中, 通过RT-PCR克隆mAb的VL、 VH基因, 并进一步组装成VH-linker-VL型的scFv片段.将scFv片段克隆到pTO-T7载体中, 在大肠杆菌中进行表达.用ELISA、 Western blot检测scFv的活性.结果: SDS-PAGE表明, 13D8的scFv在E.coli中得到高效表达, 表达量达菌体总蛋白的26.8%左右, 表达产物主要以包涵体的形式存在.间接ELISA和Western blot检测表明, 表达的13D8的scFv能与HEV OFR2区中一段重组蛋白(NE2)特异结合.竞争ELISA表明, scFv与原鼠mAb识别的为同一表位.结论: 成功地表达出具有免疫学活性的13D8的scFv.
目的: 降低HEV中和性單抗(mAb)13D8的鼠源性, 錶達其單鏈抗體(scFv).方法: 從分泌13D8鼠mAb的雜交瘤細胞中, 通過RT-PCR剋隆mAb的VL、 VH基因, 併進一步組裝成VH-linker-VL型的scFv片段.將scFv片段剋隆到pTO-T7載體中, 在大腸桿菌中進行錶達.用ELISA、 Western blot檢測scFv的活性.結果: SDS-PAGE錶明, 13D8的scFv在E.coli中得到高效錶達, 錶達量達菌體總蛋白的26.8%左右, 錶達產物主要以包涵體的形式存在.間接ELISA和Western blot檢測錶明, 錶達的13D8的scFv能與HEV OFR2區中一段重組蛋白(NE2)特異結閤.競爭ELISA錶明, scFv與原鼠mAb識彆的為同一錶位.結論: 成功地錶達齣具有免疫學活性的13D8的scFv.
목적: 강저HEV중화성단항(mAb)13D8적서원성, 표체기단련항체(scFv).방법: 종분비13D8서mAb적잡교류세포중, 통과RT-PCR극륭mAb적VL、 VH기인, 병진일보조장성VH-linker-VL형적scFv편단.장scFv편단극륭도pTO-T7재체중, 재대장간균중진행표체.용ELISA、 Western blot검측scFv적활성.결과: SDS-PAGE표명, 13D8적scFv재E.coli중득도고효표체, 표체량체균체총단백적26.8%좌우, 표체산물주요이포함체적형식존재.간접ELISA화Western blot검측표명, 표체적13D8적scFv능여HEV OFR2구중일단중조단백(NE2)특이결합.경쟁ELISA표명, scFv여원서mAb식별적위동일표위.결론: 성공지표체출구유면역학활성적13D8적scFv.
