免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2004年
z1期
152-155
,共4页
黄顺军%王希良%李名扬%罗德炎%阳幼荣%马丽娟
黃順軍%王希良%李名颺%囉德炎%暘幼榮%馬麗娟
황순군%왕희량%리명양%라덕염%양유영%마려연
鼠疫耶尔森氏菌%F1基因%V基因%基因克隆%基因表达
鼠疫耶爾森氏菌%F1基因%V基因%基因剋隆%基因錶達
서역야이삼씨균%F1기인%V기인%기인극륭%기인표체
目的通过构建pET-11c-F1-V融合表达质粒,从而获得具有免疫原性的融合蛋白.方法克隆鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)的V基因和V基因,然后将F1基因和V基因分别连接到pGEM-T载体上,经测序正确后再将F1基因和V基因连接到pET-11c原核表达载体上,构建pET-11c-F1-V融合表达质粒,并转化到BL21(DE3)大肠杆菌中,进行PCR及双酶切鉴定,筛选阳性克隆,通过IPTG诱导F1-V表达,经SDS-PAGE检测表达产物,通过Western-Blot检测重组蛋白的免疫原性.结果测序结果显示F1基因的碱基序列与Gene-bank(X 61996)完全一致,V基因的碱基序列与Gene-bank(M 26405)相比在564 bp处有一同义突变;SDS-PAGE在Mr约58 000处出现一条蛋白条带,经薄层扫描分析目的蛋白条带约占全菌体蛋白的25%左右,主要以可溶性蛋白形式存在;Western-Blot显示重组蛋白具有免疫原性.结论成功地构建了pET-11c-F1-V融合表达质粒,并且在大肠杆菌中获得了高效表达,表达的蛋白具有免疫原性.
目的通過構建pET-11c-F1-V融閤錶達質粒,從而穫得具有免疫原性的融閤蛋白.方法剋隆鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)的V基因和V基因,然後將F1基因和V基因分彆連接到pGEM-T載體上,經測序正確後再將F1基因和V基因連接到pET-11c原覈錶達載體上,構建pET-11c-F1-V融閤錶達質粒,併轉化到BL21(DE3)大腸桿菌中,進行PCR及雙酶切鑒定,篩選暘性剋隆,通過IPTG誘導F1-V錶達,經SDS-PAGE檢測錶達產物,通過Western-Blot檢測重組蛋白的免疫原性.結果測序結果顯示F1基因的堿基序列與Gene-bank(X 61996)完全一緻,V基因的堿基序列與Gene-bank(M 26405)相比在564 bp處有一同義突變;SDS-PAGE在Mr約58 000處齣現一條蛋白條帶,經薄層掃描分析目的蛋白條帶約佔全菌體蛋白的25%左右,主要以可溶性蛋白形式存在;Western-Blot顯示重組蛋白具有免疫原性.結論成功地構建瞭pET-11c-F1-V融閤錶達質粒,併且在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,錶達的蛋白具有免疫原性.
목적통과구건pET-11c-F1-V융합표체질립,종이획득구유면역원성적융합단백.방법극륭서역야이삼씨균(Yersiniapestis)적V기인화V기인,연후장F1기인화V기인분별련접도pGEM-T재체상,경측서정학후재장F1기인화V기인련접도pET-11c원핵표체재체상,구건pET-11c-F1-V융합표체질립,병전화도BL21(DE3)대장간균중,진행PCR급쌍매절감정,사선양성극륭,통과IPTG유도F1-V표체,경SDS-PAGE검측표체산물,통과Western-Blot검측중조단백적면역원성.결과측서결과현시F1기인적감기서렬여Gene-bank(X 61996)완전일치,V기인적감기서렬여Gene-bank(M 26405)상비재564 bp처유일동의돌변;SDS-PAGE재Mr약58 000처출현일조단백조대,경박층소묘분석목적단백조대약점전균체단백적25%좌우,주요이가용성단백형식존재;Western-Blot현시중조단백구유면역원성.결론성공지구건료pET-11c-F1-V융합표체질립,병차재대장간균중획득료고효표체,표체적단백구유면역원성.
