CAJ | 학술논문

人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位
인신뇨산전운단백1기인극륭、항체제비급기재신소관상피세포중적정위
Location of hUART1 in proximal tubular epithelial cell by cloning the hUART1 gene and preparing the polyclonal antibody

万方数据

解放军医学杂志解放軍醫學雜誌 해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2005年 5期 397-400 ,共4页

吴镝%张萍%陈香美%洪权%许国双%张晓洁%冯哲%丁瑞%侯剀

오적%장평%진향미%홍권%허국쌍%장효길%풍철%정서%후개

阴离子转运蛋白质类%尿酸%荧光抗体技术%抗体陰離子轉運蛋白質類%尿痠%熒光抗體技術%抗體
음리자전운단백질류%뇨산%형광항체기술%항체

目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位.方法用RT-PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1-pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX-5X-1.诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Western blot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达.将hURAT1-pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hURAT1-pEGFP在肾小管上皮细胞LLC-PK1细胞膜的定位及表达.结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Western blot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达.激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1-pEGFP定位于LLC-PK1细胞膜.结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘.
목적제비인뇨산전운단백1(hURAT1)다극륭항체병이용해항체검측hURAT1재신조직중적표체급아세포정위.방법용RT-PCR방법종인신조직중확증출hURAT1기인전장급기항원표위구,분별구건록색형광단백hURAT1-pEGFP융합표체재체화GST융합표체재체pGEX-5X-1.유도표체병순화GST융합단백,이용개량적단백면역법제비다극륭항체;Western blot급면역조화방법관찰인신조직적hUART1기인산물적표체.장hURAT1-pEGFP중조질립전염세포,격광공취초현미경동태관찰hURAT1-pEGFP재신소관상피세포LLC-PK1세포막적정위급표체.결과성공획득고효특이적hURAT1항체,이용해항체증실hURAT1기인편마산물분포우인신조직근단신소관쇄상연,Western blot증실hURAT1단백재신조직중표체.격광공취초현미경동태관찰현시hURAT1-pEGFP정위우LLC-PK1세포막.결론제비적hURAT1항체급기전장기인가용우hURAT1기인적생리공능급병리연구,hURAT1기인편마산물분포우인신조직근단신소관쇄상연.