目的:探讨发作间痫样放电致大鼠认知行为障碍时的相关神经生物学改变.方法:实验于2001-1/2003-12在第三军医大学大坪医院及成都军医总医院完成.选择6～7周龄雄性Wistar大鼠241只,成组设计随机分为海马点燃组(n=62),电极对照组(n=58),正常对照组(n=56)及发作间痫样放电组(n=65).将大鼠用2%戊巴比妥钠腹腔麻醉后,固定于立体定向仪上,暴露颅顶骨,按Pllegrino大鼠脑图谱确定海马CA1区双极漆包不锈钢刺激电极埋植部位,海马快速电点燃模型电刺激参数为波宽1 ms、频率15 Hz、串长10 s、刺激强度400 μA、串隔5 min,恒流、单向方波,刺激40次.发作间痫样放电大鼠在海马快速电点燃后13 d再次阈下电刺激,电刺激参数为波宽1 ms、频率25 Hz、串长10 s、刺激强度100 μA、串隔7 min,恒流、单向方波,刺激15次.电极对照组于海马CA1区埋植电极,不给予电刺激.于电点燃后1,7,14 d分三次取各组大鼠8只,麻醉断头处死后分离双侧海马,常规方法制备105～107/mL的细胞悬液及胞浆蛋白,采用荧光探针标记法及流式细胞仪分别定量观测大鼠海马细胞内游离钙含量与钙调素相对活性平均通道荧光的变化,采用蛋白质免疫印迹法检测海马组织总钙调素、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα与钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅳ表达的动态变化规律.采用SPSS 9.0软件进行单因素或双因素方差分析,以及各组均数的最小显著差值法和Tamhane's T 2检验.结果:实验过程中发作间痫样放电组、海马点燃及电极对照组分别有9、6、2只大鼠因电极脱落而被剔除实验,进入结果分析224只.①海马细胞内游离钙浓度变化:电点燃后1 d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马细胞内游离钙浓度明显高于对照组及电极对照组[(659.2±134.3,684.6±138.5)nmol/L,( 209.6±40.1,221.5±43.1)nmol/L,(P＜0.01)],14 d时发作间痫样放电组大鼠再次明显高于其他三组[(435.1±87.1)nmol/L,(194.9±38.3,215.1±42.0, 218.7±42.9)nmol/L,(P＜0.011)].②海马细胞内游离钙调素平均通道荧光改变:电点燃后1 d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马细胞内游离钙调素平均通道荧光明显低于正常对照组及电极对照组[(1.16±0.28,1.26±0.31),(3.35±0.82,3.38±0.83),(P＜0.01～0.05)],14 d时与其他三组比较发作间痫样放电组大鼠再次降低[(2.36±0.58),(3.08±0.74,3.61±0.88,3.20±0.76),(P＜0.05)].③海马钙调素、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅳ免疫印迹检测结果:电点燃后1 d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马钙调素、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅳ校正吸光度值均较对照组及电极对照组表达明显增高(P＜0.01),14 d时发作间痫样放电组大鼠再次明显增高(P＜0.01～0.05).而电点燃后1 d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα校正吸光度值则较对照组及电极对照组明显减少(P＜0.01),14 d时发作间痫样放电组大鼠再次明显降低(P＜0.01～0.05).结论:惊厥阈下电刺激诱发实验大鼠发作间痫样放电所致认知行为异常的同时,亦同步引发了海马细胞内游离钙浓度短期明显增高,海马细胞内游离钙调素平均通道荧光明显降低,伴有明显的海马细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶信号途径调控紊乱,这对发作间痫样放电所致情感行为异常及学习记忆障碍可能有重要意义.
目的:探討髮作間癇樣放電緻大鼠認知行為障礙時的相關神經生物學改變.方法:實驗于2001-1/2003-12在第三軍醫大學大坪醫院及成都軍醫總醫院完成.選擇6～7週齡雄性Wistar大鼠241隻,成組設計隨機分為海馬點燃組(n=62),電極對照組(n=58),正常對照組(n=56)及髮作間癇樣放電組(n=65).將大鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔痳醉後,固定于立體定嚮儀上,暴露顱頂骨,按Pllegrino大鼠腦圖譜確定海馬CA1區雙極漆包不鏽鋼刺激電極埋植部位,海馬快速電點燃模型電刺激參數為波寬1 ms、頻率15 Hz、串長10 s、刺激彊度400 μA、串隔5 min,恆流、單嚮方波,刺激40次.髮作間癇樣放電大鼠在海馬快速電點燃後13 d再次閾下電刺激,電刺激參數為波寬1 ms、頻率25 Hz、串長10 s、刺激彊度100 μA、串隔7 min,恆流、單嚮方波,刺激15次.電極對照組于海馬CA1區埋植電極,不給予電刺激.于電點燃後1,7,14 d分三次取各組大鼠8隻,痳醉斷頭處死後分離雙側海馬,常規方法製備105～107/mL的細胞懸液及胞漿蛋白,採用熒光探針標記法及流式細胞儀分彆定量觀測大鼠海馬細胞內遊離鈣含量與鈣調素相對活性平均通道熒光的變化,採用蛋白質免疫印跡法檢測海馬組織總鈣調素、鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅱα與鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅳ錶達的動態變化規律.採用SPSS 9.0軟件進行單因素或雙因素方差分析,以及各組均數的最小顯著差值法和Tamhane's T 2檢驗.結果:實驗過程中髮作間癇樣放電組、海馬點燃及電極對照組分彆有9、6、2隻大鼠因電極脫落而被剔除實驗,進入結果分析224隻.①海馬細胞內遊離鈣濃度變化:電點燃後1 d海馬點燃組及髮作間癇樣放電組大鼠海馬細胞內遊離鈣濃度明顯高于對照組及電極對照組[(659.2±134.3,684.6±138.5)nmol/L,( 209.6±40.1,221.5±43.1)nmol/L,(P＜0.01)],14 d時髮作間癇樣放電組大鼠再次明顯高于其他三組[(435.1±87.1)nmol/L,(194.9±38.3,215.1±42.0, 218.7±42.9)nmol/L,(P＜0.011)].②海馬細胞內遊離鈣調素平均通道熒光改變:電點燃後1 d海馬點燃組及髮作間癇樣放電組大鼠海馬細胞內遊離鈣調素平均通道熒光明顯低于正常對照組及電極對照組[(1.16±0.28,1.26±0.31),(3.35±0.82,3.38±0.83),(P＜0.01～0.05)],14 d時與其他三組比較髮作間癇樣放電組大鼠再次降低[(2.36±0.58),(3.08±0.74,3.61±0.88,3.20±0.76),(P＜0.05)].③海馬鈣調素、鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅱα及鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅳ免疫印跡檢測結果:電點燃後1 d海馬點燃組及髮作間癇樣放電組大鼠海馬鈣調素、鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅳ校正吸光度值均較對照組及電極對照組錶達明顯增高(P＜0.01),14 d時髮作間癇樣放電組大鼠再次明顯增高(P＜0.01～0.05).而電點燃後1 d海馬點燃組及髮作間癇樣放電組大鼠鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅱα校正吸光度值則較對照組及電極對照組明顯減少(P＜0.01),14 d時髮作間癇樣放電組大鼠再次明顯降低(P＜0.01～0.05).結論:驚厥閾下電刺激誘髮實驗大鼠髮作間癇樣放電所緻認知行為異常的同時,亦同步引髮瞭海馬細胞內遊離鈣濃度短期明顯增高,海馬細胞內遊離鈣調素平均通道熒光明顯降低,伴有明顯的海馬細胞鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶信號途徑調控紊亂,這對髮作間癇樣放電所緻情感行為異常及學習記憶障礙可能有重要意義.
목적:탐토발작간간양방전치대서인지행위장애시적상관신경생물학개변.방법:실험우2001-1/2003-12재제삼군의대학대평의원급성도군의총의원완성.선택6～7주령웅성Wistar대서241지,성조설계수궤분위해마점연조(n=62),전겁대조조(n=58),정상대조조(n=56)급발작간간양방전조(n=65).장대서용2%무파비타납복강마취후,고정우입체정향의상,폭로로정골,안Pllegrino대서뇌도보학정해마CA1구쌍겁칠포불수강자격전겁매식부위,해마쾌속전점연모형전자격삼수위파관1 ms、빈솔15 Hz、천장10 s、자격강도400 μA、천격5 min,항류、단향방파,자격40차.발작간간양방전대서재해마쾌속전점연후13 d재차역하전자격,전자격삼수위파관1 ms、빈솔25 Hz、천장10 s、자격강도100 μA、천격7 min,항류、단향방파,자격15차.전겁대조조우해마CA1구매식전겁,불급여전자격.우전점연후1,7,14 d분삼차취각조대서8지,마취단두처사후분리쌍측해마,상규방법제비105～107/mL적세포현액급포장단백,채용형광탐침표기법급류식세포의분별정량관측대서해마세포내유리개함량여개조소상대활성평균통도형광적변화,채용단백질면역인적법검측해마조직총개조소、개/개조소의뢰성단백격매Ⅱα여개/개조소의뢰성단백격매Ⅳ표체적동태변화규률.채용SPSS 9.0연건진행단인소혹쌍인소방차분석,이급각조균수적최소현저차치법화Tamhane's T 2검험.결과:실험과정중발작간간양방전조、해마점연급전겁대조조분별유9、6、2지대서인전겁탈락이피척제실험,진입결과분석224지.①해마세포내유리개농도변화:전점연후1 d해마점연조급발작간간양방전조대서해마세포내유리개농도명현고우대조조급전겁대조조[(659.2±134.3,684.6±138.5)nmol/L,( 209.6±40.1,221.5±43.1)nmol/L,(P＜0.01)],14 d시발작간간양방전조대서재차명현고우기타삼조[(435.1±87.1)nmol/L,(194.9±38.3,215.1±42.0, 218.7±42.9)nmol/L,(P＜0.011)].②해마세포내유리개조소평균통도형광개변:전점연후1 d해마점연조급발작간간양방전조대서해마세포내유리개조소평균통도형광명현저우정상대조조급전겁대조조[(1.16±0.28,1.26±0.31),(3.35±0.82,3.38±0.83),(P＜0.01～0.05)],14 d시여기타삼조비교발작간간양방전조대서재차강저[(2.36±0.58),(3.08±0.74,3.61±0.88,3.20±0.76),(P＜0.05)].③해마개조소、개/개조소의뢰성단백격매Ⅱα급개/개조소의뢰성단백격매Ⅳ면역인적검측결과:전점연후1 d해마점연조급발작간간양방전조대서해마개조소、개/개조소의뢰성단백격매Ⅳ교정흡광도치균교대조조급전겁대조조표체명현증고(P＜0.01),14 d시발작간간양방전조대서재차명현증고(P＜0.01～0.05).이전점연후1 d해마점연조급발작간간양방전조대서개/개조소의뢰성단백격매Ⅱα교정흡광도치칙교대조조급전겁대조조명현감소(P＜0.01),14 d시발작간간양방전조대서재차명현강저(P＜0.01～0.05).결론:량궐역하전자격유발실험대서발작간간양방전소치인지행위이상적동시,역동보인발료해마세포내유리개농도단기명현증고,해마세포내유리개조소평균통도형광명현강저,반유명현적해마세포개/개조소의뢰성단백격매신호도경조공문란,저대발작간간양방전소치정감행위이상급학습기억장애가능유중요의의.
