免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2006年
3期
337-340
,共4页
宋云扬%王惠芳%李艳军%高川%张靖%张金平%吴方晖
宋雲颺%王惠芳%李豔軍%高川%張靖%張金平%吳方暉
송운양%왕혜방%리염군%고천%장정%장금평%오방휘
金黄色葡萄球菌肠毒素B%克隆%多聚酶链试反应%原核表达
金黃色葡萄毬菌腸毒素B%剋隆%多聚酶鏈試反應%原覈錶達
금황색포도구균장독소B%극륭%다취매련시반응%원핵표체
目的克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,表达并纯化基因重组SEB,并对其进行活性研究.方法采用PCR技术从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增得到SEB基因,克隆到原核表达载体pET22b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,全自动测序仪测序.IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,用HiTrapTM chelating HP柱纯化重组表达的SEB,通过ELISA实验检验重组SEB的抗原性.用脂多糖和放线菌素D致敏小鼠模型检测重组SEB的毒性.结果所克隆的SEB基因核苷酸序列与报道的序列完全相同.表达的SEB在SDS-PAGE图谱的位置与预期相符,得到了SDS-PAGE电泳纯的基因重组SEB.ELISA试验结果表明,纯化的重组SEB与抗野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应.小鼠致死性试验表明,重组SEB与野生型SEB具有相同的毒性.结论在大肠杆菌中成功克隆及表达了金黄色葡萄球菌肠毒素B,为进一步分析SEB分子中相关活性位点及研究SEB发病机制打下了基础.
目的剋隆葡萄毬菌腸毒素B(SEB)基因,構建其原覈錶達載體,錶達併純化基因重組SEB,併對其進行活性研究.方法採用PCR技術從金黃色葡萄毬菌染色體DNA上擴增得到SEB基因,剋隆到原覈錶達載體pET22b(+)上,轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,全自動測序儀測序.IPTG誘導錶達,SDS-PAGE電泳分析,用HiTrapTM chelating HP柱純化重組錶達的SEB,通過ELISA實驗檢驗重組SEB的抗原性.用脂多糖和放線菌素D緻敏小鼠模型檢測重組SEB的毒性.結果所剋隆的SEB基因覈苷痠序列與報道的序列完全相同.錶達的SEB在SDS-PAGE圖譜的位置與預期相符,得到瞭SDS-PAGE電泳純的基因重組SEB.ELISA試驗結果錶明,純化的重組SEB與抗野生型SEB單剋隆抗體呈現明顯的暘性免疫反應.小鼠緻死性試驗錶明,重組SEB與野生型SEB具有相同的毒性.結論在大腸桿菌中成功剋隆及錶達瞭金黃色葡萄毬菌腸毒素B,為進一步分析SEB分子中相關活性位點及研究SEB髮病機製打下瞭基礎.
목적극륭포도구균장독소B(SEB)기인,구건기원핵표체재체,표체병순화기인중조SEB,병대기진행활성연구.방법채용PCR기술종금황색포도구균염색체DNA상확증득도SEB기인,극륭도원핵표체재체pET22b(+)상,전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,전자동측서의측서.IPTG유도표체,SDS-PAGE전영분석,용HiTrapTM chelating HP주순화중조표체적SEB,통과ELISA실험검험중조SEB적항원성.용지다당화방선균소D치민소서모형검측중조SEB적독성.결과소극륭적SEB기인핵감산서렬여보도적서렬완전상동.표체적SEB재SDS-PAGE도보적위치여예기상부,득도료SDS-PAGE전영순적기인중조SEB.ELISA시험결과표명,순화적중조SEB여항야생형SEB단극륭항체정현명현적양성면역반응.소서치사성시험표명,중조SEB여야생형SEB구유상동적독성.결론재대장간균중성공극륭급표체료금황색포도구균장독소B,위진일보분석SEB분자중상관활성위점급연구SEB발병궤제타하료기출.
