中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
10期
36-40
,共5页
王敏秀%苏鑫铭%于春梅%曹瑞兵%陈溥言
王敏秀%囌鑫銘%于春梅%曹瑞兵%陳溥言
왕민수%소흠명%우춘매%조서병%진부언
伪狂犬病病毒%TK基因%Cre%loxP%GFP重组病毒
偽狂犬病病毒%TK基因%Cre%loxP%GFP重組病毒
위광견병병독%TK기인%Cre%loxP%GFP중조병독
根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP.克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP.基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRV SH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1.将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2.PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代.LD50试验表明rPrV2的毒力下降.
根據GenBank已髮錶的pEGFP-C1序列,設計併閤成兩對引物,PCR擴增齣兩耑各含一loxP位點的GFP錶達盒GFP-loxP.剋隆于轉移載體pSKLR穫得pSKLR-GFP-loxP.基于同源重組原理,pSKLR-GFP-loxP與PRV SH株基因組DNA共轉染293T細胞,在BrdU的篩選壓力下,利用蝕斑法在TK-143細胞上篩選齣錶達GFP的TK基因缺失的重組毒株rPRV1.將錶達Cre酶的質粒載體pPOG231與rPRV1基因組DNA共轉染293T細胞,在Cre酶的作用下去除GFP錶達盒以及一箇loxP位點,篩選得到含單箇loxP位點的重組病毒株rPRV2.PCR擴增證實所穫得的重組病毒TK缺失270bp,隻有一箇34bp的loxP位點,併且能在RK-13細胞上穩定傳代.LD50試驗錶明rPrV2的毒力下降.
근거GenBank이발표적pEGFP-C1서렬,설계병합성량대인물,PCR확증출량단각함일loxP위점적GFP표체합GFP-loxP.극륭우전이재체pSKLR획득pSKLR-GFP-loxP.기우동원중조원리,pSKLR-GFP-loxP여PRV SH주기인조DNA공전염293T세포,재BrdU적사선압력하,이용식반법재TK-143세포상사선출표체GFP적TK기인결실적중조독주rPRV1.장표체Cre매적질립재체pPOG231여rPRV1기인조DNA공전염293T세포,재Cre매적작용하거제GFP표체합이급일개loxP위점,사선득도함단개loxP위점적중조병독주rPRV2.PCR확증증실소획득적중조병독TK결실270bp,지유일개34bp적loxP위점,병차능재RK-13세포상은정전대.LD50시험표명rPrV2적독력하강.
