中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
10期
932-935
,共4页
余大海%韦一然%蔡宏%朱玉贤
餘大海%韋一然%蔡宏%硃玉賢
여대해%위일연%채굉%주옥현
牛结核病%TB10.4蛋白%间接ELISA法
牛結覈病%TB10.4蛋白%間接ELISA法
우결핵병%TB10.4단백%간접ELISA법
目的 构建含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片断的原核表达载体,在E.coli中诱导表达带组氨酸标记的该融合蛋白.分别以TB10.4蛋白, PPD蛋白以及TB10.4与MPT83混合蛋白为抗原,用间接ELISA法鉴别牛结核病.方法 PCR法扩增tb10.4基因片段,连接到pET-22b(+)原核表达载体中,将重组子转化到大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化.之后将TB10.4,PPD,TB10.4及MPT83混合蛋白作为抗原用间接ELISA法检测牛结核病.结果 使用结核杆菌早期分泌蛋白TB10.4作为抗原用间接ELISA方法快速检测牛结核病,并区分BCG免疫的健康牛和感染牛的结果显示灵敏度为23%,没有假阳性反应.结论 用PPD作为抗原进行检测灵敏度达到48%,但假阳性率达到21%;用TB10.4与MPT83混合抗原检测时灵敏度下降到6%,假阳性率1%.
目的 構建含結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4基因片斷的原覈錶達載體,在E.coli中誘導錶達帶組氨痠標記的該融閤蛋白.分彆以TB10.4蛋白, PPD蛋白以及TB10.4與MPT83混閤蛋白為抗原,用間接ELISA法鑒彆牛結覈病.方法 PCR法擴增tb10.4基因片段,連接到pET-22b(+)原覈錶達載體中,將重組子轉化到大腸桿菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG誘導,進行蛋白錶達、純化.之後將TB10.4,PPD,TB10.4及MPT83混閤蛋白作為抗原用間接ELISA法檢測牛結覈病.結果 使用結覈桿菌早期分泌蛋白TB10.4作為抗原用間接ELISA方法快速檢測牛結覈病,併區分BCG免疫的健康牛和感染牛的結果顯示靈敏度為23%,沒有假暘性反應.結論 用PPD作為抗原進行檢測靈敏度達到48%,但假暘性率達到21%;用TB10.4與MPT83混閤抗原檢測時靈敏度下降到6%,假暘性率1%.
목적 구건함결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis)tb10.4기인편단적원핵표체재체,재E.coli중유도표체대조안산표기적해융합단백.분별이TB10.4단백, PPD단백이급TB10.4여MPT83혼합단백위항원,용간접ELISA법감별우결핵병.방법 PCR법확증tb10.4기인편단,련접도pET-22b(+)원핵표체재체중,장중조자전화도대장간균단백매결함형균주BL21(DE3)/PolysS,용IPTG유도,진행단백표체、순화.지후장TB10.4,PPD,TB10.4급MPT83혼합단백작위항원용간접ELISA법검측우결핵병.결과 사용결핵간균조기분비단백TB10.4작위항원용간접ELISA방법쾌속검측우결핵병,병구분BCG면역적건강우화감염우적결과현시령민도위23%,몰유가양성반응.결론 용PPD작위항원진행검측령민도체도48%,단가양성솔체도21%;용TB10.4여MPT83혼합항원검측시령민도하강도6%,가양성솔1%.
