双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定
쌍순반자진핵표체재체pVAX1-IRES적구건여감정
Construction and identification of bicistronic eukaryotic expression vector pVAX1-IRES for gene coexpression
  • 万方数据
    军事医学科学院院刊 군사의학과학원원간
    BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
    2008年 2期 111-115 ,共5页

    阎瑾琦%刘国栋%刘荷中%贾锐%王浩%刘宁%张亮%于继云

    염근기%류국동%류하중%가예%왕호%류저%장량%우계운

    内部核糖体进入位点%真核表达%疫苗,DNA 內部覈糖體進入位點%真覈錶達%疫苗,DNA
    내부핵당체진입위점%진핵표체%역묘,DNA
    目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效.方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达.结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功.结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备.
    목적:위괄응악성종류면역치료중다기인연합응용적수요,재진핵표체재체pVAX1적기출상,이용내부핵당체진입위점IRES서렬,구건쌍순반자진핵표체재체pVAX1-IRES,이증강DNA역묘적면역료효.방법:통과PCR확증획득목적기인IRES병정향극륭도pVAX1재체중,연후재IRES서렬적상하유분별삽입홍색형광단백기인DsRed1화증강형록색형광단백기인EGFP,순시전염인배태신세포293T,통과류식세포술화면역형광험증기인표체.결과:pVAX1-IRES경상응매절화측서감정,여예기설계일치,DsRed1기인화EGFP기인재pVAX1-IRES재체중,불부가이분별표체,이차가이동시표체,현시해쌍순반자진핵표체재체구건성공.결론:pVAX1-IRES쌍순반자표체재체적구건,위기인연합표체화악성종류적면역치료작료필요준비.
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