CAJ | 학술논문

背景:目前已经建立了数百个小鼠的胚胎干细胞系,这些细胞系大多数来源于129,C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠,而昆明株小鼠的胚胎干细胞建系的成功率很低.目的:探寻昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的方法,以期提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的成功率.设计、时间及地点:以细胞为对象的观察性实验,于2006-04/2007-06在重庆市神经病学重点实验室完成.材料:昆明白小鼠3.5d和4d胚龄的囊胚.方法:分别将昆明白小鼠3.5d和4d胚龄的囊胚培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,四五天后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养,分别采用2.5g/L胰蛋白酶-0.4g/L乙二胺四乙酸与1g/L胰蛋白酶0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械离散胚胎干细胞集落.主要观察指标:观察集落的生长情况,通过碱性磷酸酶染色、OCT-4染色、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定.结果:[1]4d胚龄胚胎的贴壁率、内细胞团出现率及克隆形成率高于3.5d胚龄(P<0.05).[2]采用1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械作用,分离克隆胚胎干细胞效果较好.[3]胚胎干细胞呈集落性生长,符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性,悬浮培养胚胎干细胞能得到囊状胚体.结论:采用4d胚龄的囊胚和1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min,并辅以机械作用的消化方法,有助于提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的能力.
배경:목전이경건립료수백개소서적배태간세포계,저사세포계대다수래원우129,C57BL/6J화BALB/C품계적소서,이곤명주소서적배태간세포건계적성공솔흔저.목적:탐심곤명소서배태간세포분리배양적방법,이기제고곤명소서배태간세포건주적성공솔.설계、시간급지점:이세포위대상적관찰성실험,우2006-04/2007-06재중경시신경병학중점실험실완성.재료:곤명백소서3.5d화4d배령적낭배.방법:분별장곤명백소서3.5d화4d배령적낭배배양재소서배태성섬유세포사양층상,사오천후취륭기생장적내세포단괴분리후재배양,분별채용2.5g/L이단백매-0.4g/L을이알사을산여1g/L이단백매0.2g/L을이알사을산실온작용2～4min병보이궤계리산배태간세포집락.주요관찰지표:관찰집락적생장정황,통과감성린산매염색、OCT-4염색、세포핵형분석등대세포집락진행감정.결과:[1]4d배령배태적첩벽솔、내세포단출현솔급극륭형성솔고우3.5d배령(P<0.05).[2]채용1g/L이단백매-0.2g/L을이알사을산실온작용2～4min병보이궤계작용,분리극륭배태간세포효과교호.[3]배태간세포정집락성생장,부합소서배태간세포적일계렬특성,현부배양배태간세포능득도낭상배체.결론:채용4d배령적낭배화1g/L이단백매-0.2g/L을이알사을산실온작용2～4min,병보이궤계작용적소화방법,유조우제고곤명소서배태간세포건주적능력.