应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2009年
1期
95-99
,共5页
任东升%官家发%李德华%梁波%吴洽庆
任東升%官傢髮%李德華%樑波%吳洽慶
임동승%관가발%리덕화%량파%오흡경
载脂蛋白A5%原核表达%发酵%纯化%抗体
載脂蛋白A5%原覈錶達%髮酵%純化%抗體
재지단백A5%원핵표체%발효%순화%항체
人载脂蛋白A5(ApoA5)是血浆三酰甘油水平的重要决定因素之一,与心血管疾病密切相关,因此获得高纯度的载脂蛋白A5及其抗体具有重要的意义.本文利用PCR技术,从人肝癌细胞系7721的cDNA中扩增出ApoA5基因,并克隆到pThioHisD载体中导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达.经优化条件,发酵得到高效表达的融合蛋白,利用融合蛋白上的一段组氨酸序列,用镍离子亲和柱进行纯化,得到纯度大于95%的融合蛋白.使用纯化蛋白免疫新西兰大耳兔,得到多克隆抗体,Western印迹结果显示此多克隆抗体能与ApoA5特异性结合.图6参28
人載脂蛋白A5(ApoA5)是血漿三酰甘油水平的重要決定因素之一,與心血管疾病密切相關,因此穫得高純度的載脂蛋白A5及其抗體具有重要的意義.本文利用PCR技術,從人肝癌細胞繫7721的cDNA中擴增齣ApoA5基因,併剋隆到pThioHisD載體中導入大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)中進行錶達.經優化條件,髮酵得到高效錶達的融閤蛋白,利用融閤蛋白上的一段組氨痠序列,用鎳離子親和柱進行純化,得到純度大于95%的融閤蛋白.使用純化蛋白免疫新西蘭大耳兔,得到多剋隆抗體,Western印跡結果顯示此多剋隆抗體能與ApoA5特異性結閤.圖6參28
인재지단백A5(ApoA5)시혈장삼선감유수평적중요결정인소지일,여심혈관질병밀절상관,인차획득고순도적재지단백A5급기항체구유중요적의의.본문이용PCR기술,종인간암세포계7721적cDNA중확증출ApoA5기인,병극륭도pThioHisD재체중도입대장간균Escherichia coli BL21(DE3)중진행표체.경우화조건,발효득도고효표체적융합단백,이용융합단백상적일단조안산서렬,용얼리자친화주진행순화,득도순도대우95%적융합단백.사용순화단백면역신서란대이토,득도다극륭항체,Western인적결과현시차다극륭항체능여ApoA5특이성결합.도6삼28
