农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
1134-1142
,共9页
滕炎玲%罗军%李君%赵旺生%王桢%王维%胡仕良
滕炎玲%囉軍%李君%趙旺生%王楨%王維%鬍仕良
등염령%라군%리군%조왕생%왕정%왕유%호사량
西农萨能奶山羊%甘油三酯水解酶%基因克隆%组织表达
西農薩能奶山羊%甘油三酯水解酶%基因剋隆%組織錶達
서농살능내산양%감유삼지수해매%기인극륭%조직표체
甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)是水解甘油三酯的关键酶.本研究采用RT-PCR和RACE技术,分离并克隆了西农萨能奶山羊(Capra hircus)ATGL基因的cDNA序列,其全长2 074 bp(GenBank收录号为:GQ918145),包括5'UTR 141 bp,CDS 1 461 bp,和3'UTR 472 bp,该基因编码486个氨基酸(GenBank收录号为:ADD25174).经氨基酸序列分析发现,山羊与GenBank中牛(Bos taurus)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、猪(Sus scrofa)和人(Homo sapiens)的ATGL的相似性较高,均在85%以上.经蛋白质结构分析表明,其蛋白质的分子量为53 243.4 D,等电点为7.4,具有GXSXG(氨基乙酸-X-丝氨酸-X-氨基乙酸)脂肪酶活性特征结构和Patatin结构域及α/β水解酶折叠域,在N端存在跨膜螺旋结构,并且整个序列中不含信号肽.此外,本研究还通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对A TGL基因进行了组织表达分析.结果表明,在所检测的12个组织或器官中均有A TGL mRNA存在,其中皮下脂肪组织中表达最丰富,并且远远高于其它组织或器官,肺、乳腺次之,心脏相对最少.ATGL基因在奶山羊的乳腺组织中具有较高的表达水平,为该基因的功能研究提供了实验依据.
甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)是水解甘油三酯的關鍵酶.本研究採用RT-PCR和RACE技術,分離併剋隆瞭西農薩能奶山羊(Capra hircus)ATGL基因的cDNA序列,其全長2 074 bp(GenBank收錄號為:GQ918145),包括5'UTR 141 bp,CDS 1 461 bp,和3'UTR 472 bp,該基因編碼486箇氨基痠(GenBank收錄號為:ADD25174).經氨基痠序列分析髮現,山羊與GenBank中牛(Bos taurus)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、豬(Sus scrofa)和人(Homo sapiens)的ATGL的相似性較高,均在85%以上.經蛋白質結構分析錶明,其蛋白質的分子量為53 243.4 D,等電點為7.4,具有GXSXG(氨基乙痠-X-絲氨痠-X-氨基乙痠)脂肪酶活性特徵結構和Patatin結構域及α/β水解酶摺疊域,在N耑存在跨膜螺鏇結構,併且整箇序列中不含信號肽.此外,本研究還通過實時熒光定量PCR(RT-qPCR)技術對A TGL基因進行瞭組織錶達分析.結果錶明,在所檢測的12箇組織或器官中均有A TGL mRNA存在,其中皮下脂肪組織中錶達最豐富,併且遠遠高于其它組織或器官,肺、乳腺次之,心髒相對最少.ATGL基因在奶山羊的乳腺組織中具有較高的錶達水平,為該基因的功能研究提供瞭實驗依據.
감유삼지수해매(adipose triglyceride lipase,ATGL)시수해감유삼지적관건매.본연구채용RT-PCR화RACE기술,분리병극륭료서농살능내산양(Capra hircus)ATGL기인적cDNA서렬,기전장2 074 bp(GenBank수록호위:GQ918145),포괄5'UTR 141 bp,CDS 1 461 bp,화3'UTR 472 bp,해기인편마486개안기산(GenBank수록호위:ADD25174).경안기산서렬분석발현,산양여GenBank중우(Bos taurus)、대서(Rattus norvegicus)、소서(Mus musculus)、저(Sus scrofa)화인(Homo sapiens)적ATGL적상사성교고,균재85%이상.경단백질결구분석표명,기단백질적분자량위53 243.4 D,등전점위7.4,구유GXSXG(안기을산-X-사안산-X-안기을산)지방매활성특정결구화Patatin결구역급α/β수해매절첩역,재N단존재과막라선결구,병차정개서렬중불함신호태.차외,본연구환통과실시형광정량PCR(RT-qPCR)기술대A TGL기인진행료조직표체분석.결과표명,재소검측적12개조직혹기관중균유A TGL mRNA존재,기중피하지방조직중표체최봉부,병차원원고우기타조직혹기관,폐、유선차지,심장상대최소.ATGL기인재내산양적유선조직중구유교고적표체수평,위해기인적공능연구제공료실험의거.