CAJ | 학술논문

旨在研究肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的特染条件,并对4对Hsp70干抚序列进行筛选,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术研究Hsp70对胃肠道的保护功能以及介导信号通路的机理打下基础.以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳高子脂质体特染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和特染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对特染效率的影响,并进一步采用RT-PCR和Western blotting方法对Hsp70干扰序列进行筛选.试验结果表明,采用脂质体转染法可获得较高的转染效率,其中以80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000组的转染效率最高(85.77％).针对4个不同靶位点,进行Hsp70基因干涉,结果表明,4个组中Hsp70 mRNA的表达显著下降,其中oligo 4组的基因表达极显著降低.Western blotting的结果表明,oligo 2、oligo3和oligo4组中的Hap70蛋白表达极显著降低.最终确定80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000为最佳转染条件,以oligo 4(Hap70的基因位点为3672 -3692)为最佳RNA干扰靶基因.
지재연구장상피세포(IEC-6)RNA간우효솔적특염조건,병대4대Hsp70간무서렬진행사선,위진일보이RNA간우(RNAi)기술연구Hsp70대위장도적보호공능이급개도신호통로적궤리타하기출.이24공배양판배양IEC-6세포,이용양고자지질체특염FAM-siRNA편단진입IEC-6세포,채용형광도치현미경화류식세포의검측FAM-siRNA화특염시제Lipofectamine 2000불동제량비례대특염효솔적영향,병진일보채용RT-PCR화Western blotting방법대Hsp70간우서렬진행사선.시험결과표명,채용지질체전염법가획득교고적전염효솔,기중이80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000조적전염효솔최고(85.77％).침대4개불동파위점,진행Hsp70기인간섭,결과표명,4개조중Hsp70 mRNA적표체현저하강,기중oligo 4조적기인표체겁현저강저.Western blotting적결과표명,oligo 2、oligo3화oligo4조중적Hap70단백표체겁현저강저.최종학정80 nmol/L FAM-siRNA+1μL Lipofectamine 2000위최가전염조건,이oligo 4(Hap70적기인위점위3672 -3692)위최가RNA간우파기인.