新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
7期
1250-1255
,共6页
张伟%刘炜炜%秦荣%张建云%黄家风
張偉%劉煒煒%秦榮%張建雲%黃傢風
장위%류위위%진영%장건운%황가풍
重组PCR%融合基因%RNA沉默%载体构建%双价抗性
重組PCR%融閤基因%RNA沉默%載體構建%雙價抗性
중조PCR%융합기인%RNA침묵%재체구건%쌍개항성
[目的]构建通过表达dsRNA,诱导植物基因沉默机制可抗2种病毒的表达载体.[方法]根据已报道番茄花叶病毒(ToMV)的运动蛋白基因(MP)和黄瓜花叶病毒(CMV)的沉默抑制子基因(2b)的核苷酸序列设计特异性引物,扩增到部分△MP和2b基因；然后通过重组PCR技术将2个病毒基因进行融合,获得长度为676 bp的融合基因△MP-2b.再将融合基因以反向重复的方式与大豆内含子相连,并定向插入到植物表达载体pBIN438上35S启动子下游.[结果]构建了含两种不同病毒来源基因的植物表达载体pBIN438△MP-2b(i/r).酶切和PCR鉴定证明所构建的载体与预期的设计完全一致.[结论]为利用RNA沉默原理进行植物广谱抗病研究奠定了基础.
[目的]構建通過錶達dsRNA,誘導植物基因沉默機製可抗2種病毒的錶達載體.[方法]根據已報道番茄花葉病毒(ToMV)的運動蛋白基因(MP)和黃瓜花葉病毒(CMV)的沉默抑製子基因(2b)的覈苷痠序列設計特異性引物,擴增到部分△MP和2b基因；然後通過重組PCR技術將2箇病毒基因進行融閤,穫得長度為676 bp的融閤基因△MP-2b.再將融閤基因以反嚮重複的方式與大豆內含子相連,併定嚮插入到植物錶達載體pBIN438上35S啟動子下遊.[結果]構建瞭含兩種不同病毒來源基因的植物錶達載體pBIN438△MP-2b(i/r).酶切和PCR鑒定證明所構建的載體與預期的設計完全一緻.[結論]為利用RNA沉默原理進行植物廣譜抗病研究奠定瞭基礎.
[목적]구건통과표체dsRNA,유도식물기인침묵궤제가항2충병독적표체재체.[방법]근거이보도번가화협병독(ToMV)적운동단백기인(MP)화황과화협병독(CMV)적침묵억제자기인(2b)적핵감산서렬설계특이성인물,확증도부분△MP화2b기인；연후통과중조PCR기술장2개병독기인진행융합,획득장도위676 bp적융합기인△MP-2b.재장융합기인이반향중복적방식여대두내함자상련,병정향삽입도식물표체재체pBIN438상35S계동자하유.[결과]구건료함량충불동병독래원기인적식물표체재체pBIN438△MP-2b(i/r).매절화PCR감정증명소구건적재체여예기적설계완전일치.[결론]위이용RNA침묵원리진행식물엄보항병연구전정료기출.
