解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2003年
3期
306-311
,共6页
岳凤鸣%赵焕英%杨慧%高福禄%徐群渊
嶽鳳鳴%趙煥英%楊慧%高福祿%徐群淵
악봉명%조환영%양혜%고복록%서군연
人胰岛素样生长因子Ⅰ%克隆%表达%生物活性
人胰島素樣生長因子Ⅰ%剋隆%錶達%生物活性
인이도소양생장인자Ⅰ%극륭%표체%생물활성
目的克隆人胰岛素样生长因子Ⅰ型(hIGF-1),构建真核表达载体并进行表达及活性检测,为IGF-1基因治疗糖尿病奠定基础.方法提取胎儿肝脏总RNA,RT-PCR法扩增IGF-1cDNA片段,重组于pUCM-T载体,测序正确后构建表达载体,转染猴肾成纤维细胞系COS-7,用原位杂交和免疫组织化学检测表达,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定.结果扩增得到710 bp带有Kozak序列的IGF-1cDNA片段;成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1;IGF-1在COS-7细胞得到了表达,并具有刺激胰岛素分泌的活性.结论新构建的载体pCI-neo/hIGF-1能在COS-7细胞中表达、分泌,且所分泌的IGF-1具有生物活性.
目的剋隆人胰島素樣生長因子Ⅰ型(hIGF-1),構建真覈錶達載體併進行錶達及活性檢測,為IGF-1基因治療糖尿病奠定基礎.方法提取胎兒肝髒總RNA,RT-PCR法擴增IGF-1cDNA片段,重組于pUCM-T載體,測序正確後構建錶達載體,轉染猴腎成纖維細胞繫COS-7,用原位雜交和免疫組織化學檢測錶達,收集培養上清以胰島素刺激釋放實驗進行活性測定.結果擴增得到710 bp帶有Kozak序列的IGF-1cDNA片段;成功構建瞭真覈錶達載體pCI-neo/hIGF-1;IGF-1在COS-7細胞得到瞭錶達,併具有刺激胰島素分泌的活性.結論新構建的載體pCI-neo/hIGF-1能在COS-7細胞中錶達、分泌,且所分泌的IGF-1具有生物活性.
목적극륭인이도소양생장인자Ⅰ형(hIGF-1),구건진핵표체재체병진행표체급활성검측,위IGF-1기인치료당뇨병전정기출.방법제취태인간장총RNA,RT-PCR법확증IGF-1cDNA편단,중조우pUCM-T재체,측서정학후구건표체재체,전염후신성섬유세포계COS-7,용원위잡교화면역조직화학검측표체,수집배양상청이이도소자격석방실험진행활성측정.결과확증득도710 bp대유Kozak서렬적IGF-1cDNA편단;성공구건료진핵표체재체pCI-neo/hIGF-1;IGF-1재COS-7세포득도료표체,병구유자격이도소분비적활성.결론신구건적재체pCI-neo/hIGF-1능재COS-7세포중표체、분비,차소분비적IGF-1구유생물활성.
