生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
462-466
,共5页
张学炜%王笑梅%李明春%魏东盛%陈雪%邢来君
張學煒%王笑梅%李明春%魏東盛%陳雪%邢來君
장학위%왕소매%리명춘%위동성%진설%형래군
深黄被孢霉%潮霉素抗性%原生质体%转化
深黃被孢黴%潮黴素抗性%原生質體%轉化
심황피포매%조매소항성%원생질체%전화
利用亚硝基胍(MNNG)诱变方法筛选了一株深黄被孢霉潮霉素B敏感型1菌株M6-22-4.采用PEG介导的方法,将含有E.coli潮霉素B抗性标记的PIM质粒转入敏感株M6-22-4原生质体,并在潮霉素B浓度为400μg/mL的选择培养基上筛选转化子,获得了1.6～2.8个转化子/μg质粒DNA的转化频率.稳定性实验表明,质粒线性化后所获得的转化子在PDA培养基上传代10代以后,转接到选择平板上有31.6%仍具有HmB抗性;随机挑选了3个转化子,通过PCR方法检测到潮霉素抗性基因的存在,Southern杂交发现,潮霉素抗性基因已经以1～2拷贝数整合到深黄被孢霉M6-22-4染色体上,这是深黄被孢霉转化系统的首次报道.
利用亞硝基胍(MNNG)誘變方法篩選瞭一株深黃被孢黴潮黴素B敏感型1菌株M6-22-4.採用PEG介導的方法,將含有E.coli潮黴素B抗性標記的PIM質粒轉入敏感株M6-22-4原生質體,併在潮黴素B濃度為400μg/mL的選擇培養基上篩選轉化子,穫得瞭1.6～2.8箇轉化子/μg質粒DNA的轉化頻率.穩定性實驗錶明,質粒線性化後所穫得的轉化子在PDA培養基上傳代10代以後,轉接到選擇平闆上有31.6%仍具有HmB抗性;隨機挑選瞭3箇轉化子,通過PCR方法檢測到潮黴素抗性基因的存在,Southern雜交髮現,潮黴素抗性基因已經以1～2拷貝數整閤到深黃被孢黴M6-22-4染色體上,這是深黃被孢黴轉化繫統的首次報道.
이용아초기고(MNNG)유변방법사선료일주심황피포매조매소B민감형1균주M6-22-4.채용PEG개도적방법,장함유E.coli조매소B항성표기적PIM질립전입민감주M6-22-4원생질체,병재조매소B농도위400μg/mL적선택배양기상사선전화자,획득료1.6～2.8개전화자/μg질립DNA적전화빈솔.은정성실험표명,질립선성화후소획득적전화자재PDA배양기상전대10대이후,전접도선택평판상유31.6%잉구유HmB항성;수궤도선료3개전화자,통과PCR방법검측도조매소항성기인적존재,Southern잡교발현,조매소항성기인이경이1～2고패수정합도심황피포매M6-22-4염색체상,저시심황피포매전화계통적수차보도.
