微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2008年
6期
893-897
,共5页
赵洪坤%杜连祥%李玉%王晓娟%路福平
趙洪坤%杜連祥%李玉%王曉娟%路福平
조홍곤%두련상%리옥%왕효연%로복평
青霉素酶%异源表达%纯化%固定化青霉素酶
青黴素酶%異源錶達%純化%固定化青黴素酶
청매소매%이원표체%순화%고정화청매소매
以获得大量青霉素酶并将其用于分解牛奶中残留青霉素为目的,通过PCR方法从蜡样芽孢杆菌ATCC10987基因组中获得了青霉素酶基因,将该基因克隆至表达载体pET28a(+)中,并转化到E. coli BL21中;在IPTG诱导下对目的蛋白进行SDS-PAGE和酶活分析,结果显示最大酶活力可达到480.0 U/mL;利用Ni2+亲合层析柱纯化目的蛋白,纯化后的目的蛋白纯度超过90%;采用高碘酸钠氧化法制备固定化的青霉素酶,并利用该固定化酶将牛奶(含0.5 u青霉素G/mL)中的青霉素分解到浓度小于4 ppb程度.
以穫得大量青黴素酶併將其用于分解牛奶中殘留青黴素為目的,通過PCR方法從蠟樣芽孢桿菌ATCC10987基因組中穫得瞭青黴素酶基因,將該基因剋隆至錶達載體pET28a(+)中,併轉化到E. coli BL21中;在IPTG誘導下對目的蛋白進行SDS-PAGE和酶活分析,結果顯示最大酶活力可達到480.0 U/mL;利用Ni2+親閤層析柱純化目的蛋白,純化後的目的蛋白純度超過90%;採用高碘痠鈉氧化法製備固定化的青黴素酶,併利用該固定化酶將牛奶(含0.5 u青黴素G/mL)中的青黴素分解到濃度小于4 ppb程度.
이획득대량청매소매병장기용우분해우내중잔류청매소위목적,통과PCR방법종사양아포간균ATCC10987기인조중획득료청매소매기인,장해기인극륭지표체재체pET28a(+)중,병전화도E. coli BL21중;재IPTG유도하대목적단백진행SDS-PAGE화매활분석,결과현시최대매활력가체도480.0 U/mL;이용Ni2+친합층석주순화목적단백,순화후적목적단백순도초과90%;채용고전산납양화법제비고정화적청매소매,병이용해고정화매장우내(함0.5 u청매소G/mL)중적청매소분해도농도소우4 ppb정도.
