农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
132-137
,共6页
β-琼脂糖酶Ⅰ dagA%原核表达%包涵体复性%生物活性
β-瓊脂糖酶Ⅰ dagA%原覈錶達%包涵體複性%生物活性
β-경지당매Ⅰ dagA%원핵표체%포함체복성%생물활성
采用PCR技术从假别单胞菌(Pseudoalteromonas atlantica)19262基因组DNA中获得β-琼脂糖酶Ⅰ基因(dagA)及去除信号肽的编码序列dagA(),分别与载体pET21a连接后转人大肠杆菌(Escherichia coli)ER2566中,共表达分子伴侣Ds-bC及FkpA,筛选出以包涵体为主要表达形式的高效表达体系:ER2566-pET21a-dagA()-DsbC菌株.包涵体蛋白达到菌体总蛋白的60%左右.包涵体用8mol/L尿素溶解、镍离子亲和层析纯化和梯度稀释复性.SDS-PAGE检测表明,复性后的DagA蛋白相对分子质量约为30.8 kD,且具有水解琼脂糖的生物活性.酶学特性分析表明,在pH 4.8～6.8范围内,DagA蛋白活性保持60%以上,最适pH 5.8;在温度37～60℃均有活性.最适温度为55℃.
採用PCR技術從假彆單胞菌(Pseudoalteromonas atlantica)19262基因組DNA中穫得β-瓊脂糖酶Ⅰ基因(dagA)及去除信號肽的編碼序列dagA(),分彆與載體pET21a連接後轉人大腸桿菌(Escherichia coli)ER2566中,共錶達分子伴侶Ds-bC及FkpA,篩選齣以包涵體為主要錶達形式的高效錶達體繫:ER2566-pET21a-dagA()-DsbC菌株.包涵體蛋白達到菌體總蛋白的60%左右.包涵體用8mol/L尿素溶解、鎳離子親和層析純化和梯度稀釋複性.SDS-PAGE檢測錶明,複性後的DagA蛋白相對分子質量約為30.8 kD,且具有水解瓊脂糖的生物活性.酶學特性分析錶明,在pH 4.8～6.8範圍內,DagA蛋白活性保持60%以上,最適pH 5.8;在溫度37～60℃均有活性.最適溫度為55℃.
채용PCR기술종가별단포균(Pseudoalteromonas atlantica)19262기인조DNA중획득β-경지당매Ⅰ기인(dagA)급거제신호태적편마서렬dagA(),분별여재체pET21a련접후전인대장간균(Escherichia coli)ER2566중,공표체분자반려Ds-bC급FkpA,사선출이포함체위주요표체형식적고효표체체계:ER2566-pET21a-dagA()-DsbC균주.포함체단백체도균체총단백적60%좌우.포함체용8mol/L뇨소용해、얼리자친화층석순화화제도희석복성.SDS-PAGE검측표명,복성후적DagA단백상대분자질량약위30.8 kD,차구유수해경지당적생물활성.매학특성분석표명,재pH 4.8～6.8범위내,DagA단백활성보지60%이상,최괄pH 5.8;재온도37～60℃균유활성.최괄온도위55℃.
