中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2009年
5期
848-852
,共5页
刘颖慧%田文嘉%郑斌%韩梅%温进坤
劉穎慧%田文嘉%鄭斌%韓梅%溫進坤
류영혜%전문가%정빈%한매%온진곤
骨桥蛋白%OPN13肽%原核表达%生物学活性
骨橋蛋白%OPN13肽%原覈錶達%生物學活性
골교단백%OPN13태%원핵표체%생물학활성
目的:用大肠杆菌(E.coli)表达骨桥蛋白13肽(OPN 13),经亲和层析纯化后检测其生物学活性.方法:运用基因重组技术,将骨桥蛋白分子中含黏附序列的13肽cDNA片段与携带His编码序列的原核表达载体连接构建融合蛋白表达质粒pET-32c-OPN13.将重组质粒转化E.coli DH 5α宿主菌后,对诱导融合蛋白表达的条件进行优化.表达产物His-OPN13经Ni-NTA His Bind Resin金属离子螯合层析纯化后,分别检测其对骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响.结果:所表达的His-OPN13融合蛋白在宿主菌中以胞浆可溶性的形式存在.经亲和层析可得到高纯度的His-OPN13融合蛋白.产物活性分析表明,His-OPN13融合蛋白能特异性地抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞的黏附和迁移.结论:OPN13肽可在大肠杆菌中高效表达,并可剂量依赖性地抑制血管平滑肌细胞黏附和迁移活性.
目的:用大腸桿菌(E.coli)錶達骨橋蛋白13肽(OPN 13),經親和層析純化後檢測其生物學活性.方法:運用基因重組技術,將骨橋蛋白分子中含黏附序列的13肽cDNA片段與攜帶His編碼序列的原覈錶達載體連接構建融閤蛋白錶達質粒pET-32c-OPN13.將重組質粒轉化E.coli DH 5α宿主菌後,對誘導融閤蛋白錶達的條件進行優化.錶達產物His-OPN13經Ni-NTA His Bind Resin金屬離子螯閤層析純化後,分彆檢測其對骨橋蛋白誘導的血管平滑肌細胞黏附和遷移的影響.結果:所錶達的His-OPN13融閤蛋白在宿主菌中以胞漿可溶性的形式存在.經親和層析可得到高純度的His-OPN13融閤蛋白.產物活性分析錶明,His-OPN13融閤蛋白能特異性地抑製骨橋蛋白誘導的血管平滑肌細胞的黏附和遷移.結論:OPN13肽可在大腸桿菌中高效錶達,併可劑量依賴性地抑製血管平滑肌細胞黏附和遷移活性.
목적:용대장간균(E.coli)표체골교단백13태(OPN 13),경친화층석순화후검측기생물학활성.방법:운용기인중조기술,장골교단백분자중함점부서렬적13태cDNA편단여휴대His편마서렬적원핵표체재체련접구건융합단백표체질립pET-32c-OPN13.장중조질립전화E.coli DH 5α숙주균후,대유도융합단백표체적조건진행우화.표체산물His-OPN13경Ni-NTA His Bind Resin금속리자오합층석순화후,분별검측기대골교단백유도적혈관평활기세포점부화천이적영향.결과:소표체적His-OPN13융합단백재숙주균중이포장가용성적형식존재.경친화층석가득도고순도적His-OPN13융합단백.산물활성분석표명,His-OPN13융합단백능특이성지억제골교단백유도적혈관평활기세포적점부화천이.결론:OPN13태가재대장간균중고효표체,병가제량의뢰성지억제혈관평활기세포점부화천이활성.
