CAJ | 학술논문

目的:观察人骨肉瘤细胞(MG-63)是否存在抗失巢凋亡(anoikis)的特性,并进一步研究其分子机制.方法:将MG-63细胞分别在普通6孔板和事先用聚甲基丙烯酸2-羧乙基酯(poly-HEMA)处理过的6孔板中培育24 h、48 h、72 h和7 d,人正常成骨细胞hFOB 1.19和人正常肾上皮细胞293T作对照,在光镜、电镜下观察细胞的形态以及细胞间连接,用流式细胞术检测细胞的凋亡率.通过RT-PCR方法检测不同时期、不同生长状态下,细胞中β-catenin和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)的转录水平,并用Western blotting方法检测细胞内β-catenin、PI3K、Bcl-2和caspase-3、8、9的蛋白表达.结果:MG-63细胞在悬浮状态下培养,细胞相互之间聚集成比较致密的团块,没有发生明显的细胞凋亡(凋亡比例最高为30.29%).在贴壁生长和悬浮生长情况下,caspase-3和caspase-9的活化水平均无显著差异,而在悬浮状态下caspase-8在48 h时活化最多,然后活性减低,β-catenin和磷脂酰肌醇激酶的转录水平比对照组高,但蛋白表达水平对照组与实验组无显著差异.在悬浮状态下,Bcl-2的蛋白表达水平呈时间依赖性增长,在72 h达到最高.结论:MG-63细胞具有抗失巢凋亡的特性.细胞从细胞外基质中脱离后,早期可能激活caspase-8,从而启动并执行anoikis;Bcl-2的活化可能在后期抑制anoikis的发生.
목적:관찰인골육류세포(MG-63)시부존재항실소조망(anoikis)적특성,병진일보연구기분자궤제.방법:장MG-63세포분별재보통6공판화사선용취갑기병희산2-최을기지(poly-HEMA)처리과적6공판중배육24 h、48 h、72 h화7 d,인정상성골세포hFOB 1.19화인정상신상피세포293T작대조,재광경、전경하관찰세포적형태이급세포간련접,용류식세포술검측세포적조망솔.통과RT-PCR방법검측불동시기、불동생장상태하,세포중β-catenin화린지선기순격매(PI3K)적전록수평,병용Western blotting방법검측세포내β-catenin、PI3K、Bcl-2화caspase-3、8、9적단백표체.결과:MG-63세포재현부상태하배양,세포상호지간취집성비교치밀적단괴,몰유발생명현적세포조망(조망비례최고위30.29%).재첩벽생장화현부생장정황하,caspase-3화caspase-9적활화수평균무현저차이,이재현부상태하caspase-8재48 h시활화최다,연후활성감저,β-catenin화린지선기순격매적전록수평비대조조고,단단백표체수평대조조여실험조무현저차이.재현부상태하,Bcl-2적단백표체수평정시간의뢰성증장,재72 h체도최고.결론:MG-63세포구유항실소조망적특성.세포종세포외기질중탈리후,조기가능격활caspase-8,종이계동병집행anoikis;Bcl-2적활화가능재후기억제anoikis적발생.