作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2011年
2期
362-368
,共7页
棉花%Blind%同源克隆%表达分析
棉花%Blind%同源剋隆%錶達分析
면화%Blind%동원극륭%표체분석
Blind同源基因对植物株型调控起着重要作用.本研究用同源克隆策略,在陆地棉((Gossypium hirsutum L.)腋芽部位cDNA中克隆出2个Blind同源基因GhBlindl(GenBank登录号为HQ 115643)和GhBlind2(登录号为HQ 115644).GhBlindl和GhBlind2均由3个外显子和2个内含子组成,分别编码359个和262个氨基酸残基.组织特异性表达分析表明,GhBlindl在腋芽部位和茎尖分生组织部位优势表达,在根、叶、茎尖、幼嫩纤维表达,而在茎部不表达;GhBlind2在腋芽部位以及根、茎、叶片、茎尖表达,而在幼嫩纤维不表达.通过重组PCR技术,构建表达载体pSuper-gus-b 1和pSuper-gus-b2;应用根癌农杆菌EHA 105介导转化棉花胚性愈伤组织进行瞬时表达分析.将棉花胚性愈伤组织共培养4d后,2个表达载体转化的胚性愈伤组织中均能检测到GUS活性,但pSuper-gus-b2表达活性强于pSuper-gus-b 1.对Blind同源蛋白的保守结构域比对发现,GhBlind 1和GhBlind2与Blind同源蛋自的一致性分别达94%和91%.以Blind同源蛋自作为外参,结合NCBI已公开的23个棉花MYB蛋白构建系统发生树,发现GhBlindl 和GhBlind2与棉花大多数MYB蛋白遗传距离较远,和Blind同源蛋自组成一个较小的分支.
Blind同源基因對植物株型調控起著重要作用.本研究用同源剋隆策略,在陸地棉((Gossypium hirsutum L.)腋芽部位cDNA中剋隆齣2箇Blind同源基因GhBlindl(GenBank登錄號為HQ 115643)和GhBlind2(登錄號為HQ 115644).GhBlindl和GhBlind2均由3箇外顯子和2箇內含子組成,分彆編碼359箇和262箇氨基痠殘基.組織特異性錶達分析錶明,GhBlindl在腋芽部位和莖尖分生組織部位優勢錶達,在根、葉、莖尖、幼嫩纖維錶達,而在莖部不錶達;GhBlind2在腋芽部位以及根、莖、葉片、莖尖錶達,而在幼嫩纖維不錶達.通過重組PCR技術,構建錶達載體pSuper-gus-b 1和pSuper-gus-b2;應用根癌農桿菌EHA 105介導轉化棉花胚性愈傷組織進行瞬時錶達分析.將棉花胚性愈傷組織共培養4d後,2箇錶達載體轉化的胚性愈傷組織中均能檢測到GUS活性,但pSuper-gus-b2錶達活性彊于pSuper-gus-b 1.對Blind同源蛋白的保守結構域比對髮現,GhBlind 1和GhBlind2與Blind同源蛋自的一緻性分彆達94%和91%.以Blind同源蛋自作為外參,結閤NCBI已公開的23箇棉花MYB蛋白構建繫統髮生樹,髮現GhBlindl 和GhBlind2與棉花大多數MYB蛋白遺傳距離較遠,和Blind同源蛋自組成一箇較小的分支.
Blind동원기인대식물주형조공기착중요작용.본연구용동원극륭책략,재륙지면((Gossypium hirsutum L.)액아부위cDNA중극륭출2개Blind동원기인GhBlindl(GenBank등록호위HQ 115643)화GhBlind2(등록호위HQ 115644).GhBlindl화GhBlind2균유3개외현자화2개내함자조성,분별편마359개화262개안기산잔기.조직특이성표체분석표명,GhBlindl재액아부위화경첨분생조직부위우세표체,재근、협、경첨、유눈섬유표체,이재경부불표체;GhBlind2재액아부위이급근、경、협편、경첨표체,이재유눈섬유불표체.통과중조PCR기술,구건표체재체pSuper-gus-b 1화pSuper-gus-b2;응용근암농간균EHA 105개도전화면화배성유상조직진행순시표체분석.장면화배성유상조직공배양4d후,2개표체재체전화적배성유상조직중균능검측도GUS활성,단pSuper-gus-b2표체활성강우pSuper-gus-b 1.대Blind동원단백적보수결구역비대발현,GhBlind 1화GhBlind2여Blind동원단자적일치성분별체94%화91%.이Blind동원단자작위외삼,결합NCBI이공개적23개면화MYB단백구건계통발생수,발현GhBlindl 화GhBlind2여면화대다수MYB단백유전거리교원,화Blind동원단자조성일개교소적분지.