CAJ | 학술논문

目的:观察软骨终板营养通路通透性对外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响.方法:4周龄雄性SD大鼠20只,处死后立即手术切取腰段椎间盘(包括邻近的软骨终板),每只6个,随机分为A、B、C 3组,其中A组为正常对照组,B组用骨蜡封闭上软骨终板,C组用骨蜡封闭上、下软骨终板,3组椎间盘在体外进行整体器官培养.于培养前和培养7d、14d时,分别用Mitotracker Green荧光探针和RT-PCR方法评估椎间盘髓核细胞的活力和髓核Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达;于培养前和培养14d时用免疫组化方法观察髓核蛋白多糖、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达.结果:取材后培养前髓核细胞的荧光强度最高;在体外培养7d,3组髓核细胞的荧光强度较培养前变化均不明显,3组之间无显著性差异(P＞0.05);培养14d时A、B、C组荧光强度较培养前分别降低约19%、22%和30%,与培养前比较差异均有显著性(P＞0.05),其中C组与A、B两组比较有显著性差异(P＜0.05),A、B两组比较差异无显著性(P＞0.05).免疫组织化学观察显示在培养14d时3组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的染色强度与培养前比较均有所降低,MMP-3阳性染色增加,蛋白多糖、Ⅱ型胶原和MMP-3染色强度的变化以C组最为明显.3组髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA的表达在培养7d和14d时均较培养前显著降低(P＜0.05),其中7d时3组之间无显著性差异(P＞0.05),14d时A、B两组间无显著性差异(P＞0.05),C组与A、B组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:降低体外培养大鼠椎间盘上下软骨终板的通透性,可在短期内影响髓核细胞的生物学特性,加速椎间盘的退变.
목적:관찰연골종판영양통로통투성대외배양대서수핵세포생물학특성적영향.방법:4주령웅성SD대서20지,처사후립즉수술절취요단추간반(포괄린근적연골종판),매지6개,수궤분위A、B、C 3조,기중A조위정상대조조,B조용골사봉폐상연골종판,C조용골사봉폐상、하연골종판,3조추간반재체외진행정체기관배양.우배양전화배양7d、14d시,분별용Mitotracker Green형광탐침화RT-PCR방법평고추간반수핵세포적활력화수핵Ⅱ형효원급단백다당mRNA적표체;우배양전화배양14d시용면역조화방법관찰수핵단백다당、Ⅱ형효원화기질금속단백매3(MMP-3)적표체.결과:취재후배양전수핵세포적형광강도최고;재체외배양7d,3조수핵세포적형광강도교배양전변화균불명현,3조지간무현저성차이(P＞0.05);배양14d시A、B、C조형광강도교배양전분별강저약19%、22%화30%,여배양전비교차이균유현저성(P＞0.05),기중C조여A、B량조비교유현저성차이(P＜0.05),A、B량조비교차이무현저성(P＞0.05).면역조직화학관찰현시재배양14d시3조수핵단백다당화Ⅱ형효원적염색강도여배양전비교균유소강저,MMP-3양성염색증가,단백다당、Ⅱ형효원화MMP-3염색강도적변화이C조최위명현.3조수핵세포Ⅱ형효원화단백다당mRNA적표체재배양7d화14d시균교배양전현저강저(P＜0.05),기중7d시3조지간무현저성차이(P＞0.05),14d시A、B량조간무현저성차이(P＞0.05),C조여A、B조비교유현저성차이(P＜0.05).결론:강저체외배양대서추간반상하연골종판적통투성,가재단기내영향수핵세포적생물학특성,가속추간반적퇴변.