水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2012年
4期
610-617
,共8页
邓思平%王静杰%吴天利%朱春华%李广丽
鄧思平%王靜傑%吳天利%硃春華%李廣麗
산사평%왕정걸%오천리%주춘화%리엄려
胡子鲇%Dmrt1%DM结构域%精子发生%表达分析
鬍子鲇%Dmrt1%DM結構域%精子髮生%錶達分析
호자점%Dmrt1%DM결구역%정자발생%표체분석
以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,利用RT-PCR技术和SMART RACE技术克隆获得Dmrt1基因cDNA全长,并利用生物信息学分析其结构及功能;利用半定量RT-PCR技术检测胡子鲇性腺(精巢/卵巢)、肌肉、肠、肝脏、心脏、头肾、鳃丝、脑和眼等10种组织以及Ⅱ-Ⅴ期精巢中Dmrt1基因表达.结果表明:胡子鲇Dmrt1基因cDNA全长为1417 bp,其中5′非编码区(5′-UTR)为35 bp,3′非编码区(3′-UTR)为516 bp,开放阅读框(ORF)包含864 bp,编码287个氨基酸(aa),预测所编码DMRT1为主要位于细胞核内的不稳定性亲水蛋白.氨基酸序列比对显示,胡子鲇DMRT1与已公布的非洲胡子鲇、蟾胡子鲇、黄颡鱼等鲇形目鱼类的相似性为83.3％-96.1％.胡子鲇DMRT1中具有DMRT基因家族共有的、保守性很高的DM结构域,此结构域具有典型的“C2H2C4”锌指结构,与上述鲇形目鱼类的相似性达100％,与斑马鱼、青鳉、虹鳟等鱼类的相似性为91.9％-97.3％,而与鸡、鼠、猪人等的相似性达80％以上.组织表达显示,胡子鲇Dmrt1基因仅在精巢中表达,且II期精巢(即精子发生期)中Dmrt1基因表达量显著高于Ⅲ、Ⅳ和V期精巢(P＜0.05),而卵巢及其他8种组织中均无表达,表明Dmrt1是胡子鲇精巢特异性表达基因,可能与胡子鲇的雄性性别决定、精子发生及精巢发育密切相关.
以鬍子鲇(Clarias fuscus)為研究對象,利用RT-PCR技術和SMART RACE技術剋隆穫得Dmrt1基因cDNA全長,併利用生物信息學分析其結構及功能;利用半定量RT-PCR技術檢測鬍子鲇性腺(精巢/卵巢)、肌肉、腸、肝髒、心髒、頭腎、鰓絲、腦和眼等10種組織以及Ⅱ-Ⅴ期精巢中Dmrt1基因錶達.結果錶明:鬍子鲇Dmrt1基因cDNA全長為1417 bp,其中5′非編碼區(5′-UTR)為35 bp,3′非編碼區(3′-UTR)為516 bp,開放閱讀框(ORF)包含864 bp,編碼287箇氨基痠(aa),預測所編碼DMRT1為主要位于細胞覈內的不穩定性親水蛋白.氨基痠序列比對顯示,鬍子鲇DMRT1與已公佈的非洲鬍子鲇、蟾鬍子鲇、黃顙魚等鲇形目魚類的相似性為83.3％-96.1％.鬍子鲇DMRT1中具有DMRT基因傢族共有的、保守性很高的DM結構域,此結構域具有典型的“C2H2C4”鋅指結構,與上述鲇形目魚類的相似性達100％,與斑馬魚、青鳉、虹鱒等魚類的相似性為91.9％-97.3％,而與鷄、鼠、豬人等的相似性達80％以上.組織錶達顯示,鬍子鲇Dmrt1基因僅在精巢中錶達,且II期精巢(即精子髮生期)中Dmrt1基因錶達量顯著高于Ⅲ、Ⅳ和V期精巢(P＜0.05),而卵巢及其他8種組織中均無錶達,錶明Dmrt1是鬍子鲇精巢特異性錶達基因,可能與鬍子鲇的雄性性彆決定、精子髮生及精巢髮育密切相關.
이호자점(Clarias fuscus)위연구대상,이용RT-PCR기술화SMART RACE기술극륭획득Dmrt1기인cDNA전장,병이용생물신식학분석기결구급공능;이용반정량RT-PCR기술검측호자점성선(정소/란소)、기육、장、간장、심장、두신、새사、뇌화안등10충조직이급Ⅱ-Ⅴ기정소중Dmrt1기인표체.결과표명:호자점Dmrt1기인cDNA전장위1417 bp,기중5′비편마구(5′-UTR)위35 bp,3′비편마구(3′-UTR)위516 bp,개방열독광(ORF)포함864 bp,편마287개안기산(aa),예측소편마DMRT1위주요위우세포핵내적불은정성친수단백.안기산서렬비대현시,호자점DMRT1여이공포적비주호자점、섬호자점、황상어등점형목어류적상사성위83.3％-96.1％.호자점DMRT1중구유DMRT기인가족공유적、보수성흔고적DM결구역,차결구역구유전형적“C2H2C4”자지결구,여상술점형목어류적상사성체100％,여반마어、청장、홍준등어류적상사성위91.9％-97.3％,이여계、서、저인등적상사성체80％이상.조직표체현시,호자점Dmrt1기인부재정소중표체,차II기정소(즉정자발생기)중Dmrt1기인표체량현저고우Ⅲ、Ⅳ화V기정소(P＜0.05),이란소급기타8충조직중균무표체,표명Dmrt1시호자점정소특이성표체기인,가능여호자점적웅성성별결정、정자발생급정소발육밀절상관.
