中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
1期
80-84
,共5页
季朝能%盛小禹%姜涛%金?%毛裕民
季朝能%盛小禹%薑濤%金?%毛裕民
계조능%성소우%강도%금?%모유민
耐热碱性磷酸酯酶%功能结构域%定位
耐熱堿性燐痠酯酶%功能結構域%定位
내열감성린산지매%공능결구역%정위
为了确定耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)发挥活性所必需的功能结构城,通过PCR介导的诱变缺失,得到了N端分别缺失8、16、25个氨基酸的3个缺失体pTAPN8、pTAPN16和pTAPN25以及C端分别缺失10和30个氨基酸的两个缺失体pTAPC10和pTAPC30.经表达和活性测定,发现pTAPN8和TAPC10保持了较高的活性而其余3个缺失体则失去酶活性.据此,TAPND27的活性区域被定位在8～465氨基酸之间.在分离纯化的基础上测定了一些酶学性质.发现TAPN8和TAPC10的比活没有大的改变,Tm下降了5.5℃;TAPN8的最适反应温度上升了10℃.结果提示了N端和C端的这些氨基酸残基对热稳定性有一定的贡献,N端氨基酸残基还对酶的亲热性有贡献.
為瞭確定耐熱堿性燐痠酯酶(TAPND27)髮揮活性所必需的功能結構城,通過PCR介導的誘變缺失,得到瞭N耑分彆缺失8、16、25箇氨基痠的3箇缺失體pTAPN8、pTAPN16和pTAPN25以及C耑分彆缺失10和30箇氨基痠的兩箇缺失體pTAPC10和pTAPC30.經錶達和活性測定,髮現pTAPN8和TAPC10保持瞭較高的活性而其餘3箇缺失體則失去酶活性.據此,TAPND27的活性區域被定位在8～465氨基痠之間.在分離純化的基礎上測定瞭一些酶學性質.髮現TAPN8和TAPC10的比活沒有大的改變,Tm下降瞭5.5℃;TAPN8的最適反應溫度上升瞭10℃.結果提示瞭N耑和C耑的這些氨基痠殘基對熱穩定性有一定的貢獻,N耑氨基痠殘基還對酶的親熱性有貢獻.
위료학정내열감성린산지매(TAPND27)발휘활성소필수적공능결구성,통과PCR개도적유변결실,득도료N단분별결실8、16、25개안기산적3개결실체pTAPN8、pTAPN16화pTAPN25이급C단분별결실10화30개안기산적량개결실체pTAPC10화pTAPC30.경표체화활성측정,발현pTAPN8화TAPC10보지료교고적활성이기여3개결실체칙실거매활성.거차,TAPND27적활성구역피정위재8～465안기산지간.재분리순화적기출상측정료일사매학성질.발현TAPN8화TAPC10적비활몰유대적개변,Tm하강료5.5℃;TAPN8적최괄반응온도상승료10℃.결과제시료N단화C단적저사안기산잔기대열은정성유일정적공헌,N단안기산잔기환대매적친열성유공헌.
