中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
3期
57-62
,共6页
孙红光%闫东梅%杜柏榕%朱迅
孫紅光%閆東梅%杜柏榕%硃迅
손홍광%염동매%두백용%주신
乙肝病毒核心抗原(HBcAg)%前S1表位%融合蛋白%表达
乙肝病毒覈心抗原(HBcAg)%前S1錶位%融閤蛋白%錶達
을간병독핵심항원(HBcAg)%전S1표위%융합단백%표체
构建、表达并纯化了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白BTcs1,为开发新型HBV治疗和预防性疫苗提供实验依据.利用DNA重组技术,构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1,在大肠杆菌(HB101)中进行表达,用蔗糖密度梯度超速离心对表达产物BTcs1进行纯化,用SDS-PAGE、SEC、Western-blot和电镜进行鉴定.结果表明成功构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1,BTcs1的表达量为20～25mg/L,DOT-BLOT结果显示BTcs1主要分布在30%～50%蔗糖介质中,SDS-PAGE和SEC结果显示蛋白纯度＞95%,Western-blot结果显示BTcs1可以与抗HBcAg抗体和抗HBsAg前S1抗体特异杂交,显色条带在约28kDa处,电镜分析表明BTcs1可以自主组装成病毒样颗粒(VLP),直径约为30～34nm.为进一步探讨BTcs1的功能及应用奠定了基础.
構建、錶達併純化瞭HBcAg與HBsAg前S1錶位肽融閤蛋白BTcs1,為開髮新型HBV治療和預防性疫苗提供實驗依據.利用DNA重組技術,構建瞭HBcAg與HBsAg前S1錶位肽融閤蛋白原覈錶達質粒pBTcs1,在大腸桿菌(HB101)中進行錶達,用蔗糖密度梯度超速離心對錶達產物BTcs1進行純化,用SDS-PAGE、SEC、Western-blot和電鏡進行鑒定.結果錶明成功構建瞭HBcAg與HBsAg前S1錶位肽融閤蛋白原覈錶達質粒pBTcs1,BTcs1的錶達量為20～25mg/L,DOT-BLOT結果顯示BTcs1主要分佈在30%～50%蔗糖介質中,SDS-PAGE和SEC結果顯示蛋白純度＞95%,Western-blot結果顯示BTcs1可以與抗HBcAg抗體和抗HBsAg前S1抗體特異雜交,顯色條帶在約28kDa處,電鏡分析錶明BTcs1可以自主組裝成病毒樣顆粒(VLP),直徑約為30～34nm.為進一步探討BTcs1的功能及應用奠定瞭基礎.
구건、표체병순화료HBcAg여HBsAg전S1표위태융합단백BTcs1,위개발신형HBV치료화예방성역묘제공실험의거.이용DNA중조기술,구건료HBcAg여HBsAg전S1표위태융합단백원핵표체질립pBTcs1,재대장간균(HB101)중진행표체,용자당밀도제도초속리심대표체산물BTcs1진행순화,용SDS-PAGE、SEC、Western-blot화전경진행감정.결과표명성공구건료HBcAg여HBsAg전S1표위태융합단백원핵표체질립pBTcs1,BTcs1적표체량위20～25mg/L,DOT-BLOT결과현시BTcs1주요분포재30%～50%자당개질중,SDS-PAGE화SEC결과현시단백순도＞95%,Western-blot결과현시BTcs1가이여항HBcAg항체화항HBsAg전S1항체특이잡교,현색조대재약28kDa처,전경분석표명BTcs1가이자주조장성병독양과립(VLP),직경약위30～34nm.위진일보탐토BTcs1적공능급응용전정료기출.
