生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
546-551
,共6页
程通%杨炳春%许辰煜%张涛%杜海莲%王颖彬%张军%夏宁邵
程通%楊炳春%許辰煜%張濤%杜海蓮%王穎彬%張軍%夏寧邵
정통%양병춘%허신욱%장도%두해련%왕영빈%장군%하저소
杆状病毒%哺乳动物细胞%转导%离心
桿狀病毒%哺乳動物細胞%轉導%離心
간상병독%포유동물세포%전도%리심
重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移栽体已获得了日益广泛的应用.为进一步提高转导实验的效率,本研究利用已构建的带有CMV启动子-增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达盒的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1细胞中探索了应用离心方法提高转导实验效率的可行性.结果显示离心方法可显著提高单位时间内重组杆状病毒对哺乳动物细胞的转导效率,同时不会对靶细胞造成损伤.通过对离心时间、离心后孵育时间、病毒上清的稀释缓冲液的进一步摸索优化,结果显示病毒上清以PBS为稀释缓冲环境室温600g水平离心1h即可获得高水平的转导效率,优于在PBS环境中27℃孵育8h的效果.该方法可在获得高转导效率的同时显著缩短实验时间,具有快捷、高效、低损伤的特点,可作为一种常规操作方法用于日常实验.本研究进一步应用该方法对多种不同来源和类型的哺乳动物细胞株进行基因转导.结果显示该方法可适用于多数不同种属和组织来源的哺乳动物细胞,其中对贴壁细胞的效果最为显著.
重組桿狀病毒作為一種對哺乳動物細胞的新型基因轉移栽體已穫得瞭日益廣汎的應用.為進一步提高轉導實驗的效率,本研究利用已構建的帶有CMV啟動子-增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)錶達盒的重組桿狀病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1細胞中探索瞭應用離心方法提高轉導實驗效率的可行性.結果顯示離心方法可顯著提高單位時間內重組桿狀病毒對哺乳動物細胞的轉導效率,同時不會對靶細胞造成損傷.通過對離心時間、離心後孵育時間、病毒上清的稀釋緩遲液的進一步摸索優化,結果顯示病毒上清以PBS為稀釋緩遲環境室溫600g水平離心1h即可穫得高水平的轉導效率,優于在PBS環境中27℃孵育8h的效果.該方法可在穫得高轉導效率的同時顯著縮短實驗時間,具有快捷、高效、低損傷的特點,可作為一種常規操作方法用于日常實驗.本研究進一步應用該方法對多種不同來源和類型的哺乳動物細胞株進行基因轉導.結果顯示該方法可適用于多數不同種屬和組織來源的哺乳動物細胞,其中對貼壁細胞的效果最為顯著.
중조간상병독작위일충대포유동물세포적신형기인전이재체이획득료일익엄범적응용.위진일보제고전도실험적효솔,본연구이용이구건적대유CMV계동자-증강형록색형광단백(eGFP)표체합적중조간상병독BacV-CMV-EGFPA,재CV-1세포중탐색료응용리심방법제고전도실험효솔적가행성.결과현시리심방법가현저제고단위시간내중조간상병독대포유동물세포적전도효솔,동시불회대파세포조성손상.통과대리심시간、리심후부육시간、병독상청적희석완충액적진일보모색우화,결과현시병독상청이PBS위희석완충배경실온600g수평리심1h즉가획득고수평적전도효솔,우우재PBS배경중27℃부육8h적효과.해방법가재획득고전도효솔적동시현저축단실험시간,구유쾌첩、고효、저손상적특점,가작위일충상규조작방법용우일상실험.본연구진일보응용해방법대다충불동래원화류형적포유동물세포주진행기인전도.결과현시해방법가괄용우다수불동충속화조직래원적포유동물세포,기중대첩벽세포적효과최위현저.
