植物研究
植物研究
식물연구
BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH
2008年
4期
402-407
,共6页
周凌瑜%吴晨炜%唐东芹%宋会书%刘群录
週凌瑜%吳晨煒%唐東芹%宋會書%劉群錄
주릉유%오신위%당동근%송회서%류군록
ISSR-PCR%小苍兰%优化%正交设计
ISSR-PCR%小蒼蘭%優化%正交設計
ISSR-PCR%소창란%우화%정교설계
通过L16(45)正交试验,研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度这5个因素在4个水平上对ISSR-PCR的影响,建立了适合于小苍兰ISSR-PCR的反应体系.优化体系为:25μLPCR反应体系中含有1×Taq酶缓冲液(10 mmol·L-1KCl,8 mmol·L-1(NH4)2SO4,10 mmol·L-1Tris·HCl,pH 9.0,0.05%NP-40),2 mmol·L-1MgCl2,0.06 U·μL-1Taq酶,0.4 μmol·L-1引物,4.0 ng·/μL-1模板DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6 mmol·L-1.利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为51.5℃.该优化体系的建立为下一步对小苍兰进行ISSR分子标记奠定了基础.
通過L16(45)正交試驗,研究瞭鎂離子濃度、dNTP濃度、模闆DNA濃度、Taq DNA聚閤酶濃度、引物濃度這5箇因素在4箇水平上對ISSR-PCR的影響,建立瞭適閤于小蒼蘭ISSR-PCR的反應體繫.優化體繫為:25μLPCR反應體繫中含有1×Taq酶緩遲液(10 mmol·L-1KCl,8 mmol·L-1(NH4)2SO4,10 mmol·L-1Tris·HCl,pH 9.0,0.05%NP-40),2 mmol·L-1MgCl2,0.06 U·μL-1Taq酶,0.4 μmol·L-1引物,4.0 ng·/μL-1模闆DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6 mmol·L-1.利用溫度梯度PCR,確定瞭最適宜的退火溫度為51.5℃.該優化體繫的建立為下一步對小蒼蘭進行ISSR分子標記奠定瞭基礎.
통과L16(45)정교시험,연구료미리자농도、dNTP농도、모판DNA농도、Taq DNA취합매농도、인물농도저5개인소재4개수평상대ISSR-PCR적영향,건립료괄합우소창란ISSR-PCR적반응체계.우화체계위:25μLPCR반응체계중함유1×Taq매완충액(10 mmol·L-1KCl,8 mmol·L-1(NH4)2SO4,10 mmol·L-1Tris·HCl,pH 9.0,0.05%NP-40),2 mmol·L-1MgCl2,0.06 U·μL-1Taq매,0.4 μmol·L-1인물,4.0 ng·/μL-1모판DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP각0.6 mmol·L-1.이용온도제도PCR,학정료최괄의적퇴화온도위51.5℃.해우화체계적건립위하일보대소창란진행ISSR분자표기전정료기출.
