中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2009年
5期
1034-1037
,共4页
叶顺传%曾秋棠%吴辉文%吕云波
葉順傳%曾鞦棠%吳輝文%呂雲波
협순전%증추당%오휘문%려운파
受体,肿瘤坏死因子%绿色荧光蛋白%脐静脉血管内皮细胞
受體,腫瘤壞死因子%綠色熒光蛋白%臍靜脈血管內皮細胞
수체,종류배사인자%록색형광단백%제정맥혈관내피세포
目的:构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR 1)绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/TNFR 1,并在人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中表达.方法:分离并培养HUVECs,将已成功构建的融合表达载体pEGFP-N1/TNFR 1,通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染到HUVECs中,RT-PCR检测TNFR 1 mRNA的表达,Western blotting检测融合蛋白的瞬时表达,同时在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察.结果:成功分离HUVECs,重组pEGFP-N1/TNFR 1融合表达载体转染HUVECs后,在细胞中检测到TNFR 1基因片段,Western blotting可以检测到TNFR 1在HUVECs表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论:重组pEGFP-N1/TNFR 1融合表达载体在HUVECs中获得了表达,融合蛋白具有TNFR 1和绿色荧光蛋白(GFP)的双重活性,为进一步研究TNFR 1转位的调控因素打下基础.
目的:構建腫瘤壞死因子受體1(TNFR 1)綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-N1/TNFR 1,併在人臍靜脈血管內皮細胞(HUVECs)中錶達.方法:分離併培養HUVECs,將已成功構建的融閤錶達載體pEGFP-N1/TNFR 1,通過暘離子脂質體Lipofectin介導的方法轉染到HUVECs中,RT-PCR檢測TNFR 1 mRNA的錶達,Western blotting檢測融閤蛋白的瞬時錶達,同時在活細胞狀態下用熒光顯微鏡直接觀察.結果:成功分離HUVECs,重組pEGFP-N1/TNFR 1融閤錶達載體轉染HUVECs後,在細胞中檢測到TNFR 1基因片段,Western blotting可以檢測到TNFR 1在HUVECs錶達,用熒光顯微鏡觀察到轉染細胞中有綠色熒光蛋白錶達.結論:重組pEGFP-N1/TNFR 1融閤錶達載體在HUVECs中穫得瞭錶達,融閤蛋白具有TNFR 1和綠色熒光蛋白(GFP)的雙重活性,為進一步研究TNFR 1轉位的調控因素打下基礎.
목적:구건종류배사인자수체1(TNFR 1)록색형광단백표체재체pEGFP-N1/TNFR 1,병재인제정맥혈관내피세포(HUVECs)중표체.방법:분리병배양HUVECs,장이성공구건적융합표체재체pEGFP-N1/TNFR 1,통과양리자지질체Lipofectin개도적방법전염도HUVECs중,RT-PCR검측TNFR 1 mRNA적표체,Western blotting검측융합단백적순시표체,동시재활세포상태하용형광현미경직접관찰.결과:성공분리HUVECs,중조pEGFP-N1/TNFR 1융합표체재체전염HUVECs후,재세포중검측도TNFR 1기인편단,Western blotting가이검측도TNFR 1재HUVECs표체,용형광현미경관찰도전염세포중유록색형광단백표체.결론:중조pEGFP-N1/TNFR 1융합표체재체재HUVECs중획득료표체,융합단백구유TNFR 1화록색형광단백(GFP)적쌍중활성,위진일보연구TNFR 1전위적조공인소타하기출.
