中华临床医师杂志(电子版)
中華臨床醫師雜誌(電子版)
중화림상의사잡지(전자판)
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
5期
1144-1148
,共5页
李庆昌%王鑫%潘泳岐%刘树立%邱雪杉%王恩华
李慶昌%王鑫%潘泳岐%劉樹立%邱雪杉%王恩華
리경창%왕흠%반영기%류수립%구설삼%왕은화
连接蛋白类%癌,肝细胞%肿瘤侵润
連接蛋白類%癌,肝細胞%腫瘤侵潤
련접단백류%암,간세포%종류침윤
目的 探讨肝癌细胞中间隙连接蛋白Connexin32 对肝癌细胞运动和侵袭能力的影响及可能 的分子机制.方法 利用逆病毒感染的方法在肝癌细胞系Li-7 中建立Connexin32 蛋白表达可通过doxycyc- line 调控的Li-7 Tet-off Connexin32 稳定克隆,应用高尔基体染色确定Connexin32 蛋白亚细胞定位,应用刮擦 负荷-染料转移实验(SL-DT)方法评价间隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)水平,运用体外跨室细胞运动及侵 袭方法验证Connexin32 表达与肝癌细胞运动和侵袭能力的相关性.结果 利用逆病毒感染方法建立了稳定 整合了Connexin32 cDNA 和调控序列Tet-off 的肝癌细胞Li-7 Tet-off Connexin32 亚克隆,Western-blot 结果显 示外源性Connexin32 蛋白表达于细胞质中且受细胞培养液中多西环素(Dox)调控,当从细胞培养液中去除 Dox 时,Connexin32 表达量增加到基础表达量的4 倍;高尔基体染色显示Connexin32 蛋白定位于高尔基复合 体内,SL-DT 实验证实外源性高尔基体内表达的Connexin32 蛋白使相邻肝癌细胞间不能形成有效的GJIC,跨 室细胞运动和侵袭实验表明次高尔基体内异常蓄积的Connexin32 蛋白过表达显著增强肝癌细胞的体外运动 和侵袭能力(P 均<0.05).结论 高尔基体内异位表达的Connexin32 蛋白GJIC 非依赖性发挥促进肝癌细 胞运动和侵袭能力的作用.
目的 探討肝癌細胞中間隙連接蛋白Connexin32 對肝癌細胞運動和侵襲能力的影響及可能 的分子機製.方法 利用逆病毒感染的方法在肝癌細胞繫Li-7 中建立Connexin32 蛋白錶達可通過doxycyc- line 調控的Li-7 Tet-off Connexin32 穩定剋隆,應用高爾基體染色確定Connexin32 蛋白亞細胞定位,應用颳抆 負荷-染料轉移實驗(SL-DT)方法評價間隙連接介導的細胞間通訊(GJIC)水平,運用體外跨室細胞運動及侵 襲方法驗證Connexin32 錶達與肝癌細胞運動和侵襲能力的相關性.結果 利用逆病毒感染方法建立瞭穩定 整閤瞭Connexin32 cDNA 和調控序列Tet-off 的肝癌細胞Li-7 Tet-off Connexin32 亞剋隆,Western-blot 結果顯 示外源性Connexin32 蛋白錶達于細胞質中且受細胞培養液中多西環素(Dox)調控,噹從細胞培養液中去除 Dox 時,Connexin32 錶達量增加到基礎錶達量的4 倍;高爾基體染色顯示Connexin32 蛋白定位于高爾基複閤 體內,SL-DT 實驗證實外源性高爾基體內錶達的Connexin32 蛋白使相鄰肝癌細胞間不能形成有效的GJIC,跨 室細胞運動和侵襲實驗錶明次高爾基體內異常蓄積的Connexin32 蛋白過錶達顯著增彊肝癌細胞的體外運動 和侵襲能力(P 均<0.05).結論 高爾基體內異位錶達的Connexin32 蛋白GJIC 非依賴性髮揮促進肝癌細 胞運動和侵襲能力的作用.
목적 탐토간암세포중간극련접단백Connexin32 대간암세포운동화침습능력적영향급가능 적분자궤제.방법 이용역병독감염적방법재간암세포계Li-7 중건립Connexin32 단백표체가통과doxycyc- line 조공적Li-7 Tet-off Connexin32 은정극륭,응용고이기체염색학정Connexin32 단백아세포정위,응용괄찰 부하-염료전이실험(SL-DT)방법평개간극련접개도적세포간통신(GJIC)수평,운용체외과실세포운동급침 습방법험증Connexin32 표체여간암세포운동화침습능력적상관성.결과 이용역병독감염방법건립료은정 정합료Connexin32 cDNA 화조공서렬Tet-off 적간암세포Li-7 Tet-off Connexin32 아극륭,Western-blot 결과현 시외원성Connexin32 단백표체우세포질중차수세포배양액중다서배소(Dox)조공,당종세포배양액중거제 Dox 시,Connexin32 표체량증가도기출표체량적4 배;고이기체염색현시Connexin32 단백정위우고이기복합 체내,SL-DT 실험증실외원성고이기체내표체적Connexin32 단백사상린간암세포간불능형성유효적GJIC,과 실세포운동화침습실험표명차고이기체내이상축적적Connexin32 단백과표체현저증강간암세포적체외운동 화침습능력(P 균<0.05).결론 고이기체내이위표체적Connexin32 단백GJIC 비의뢰성발휘촉진간암세 포운동화침습능력적작용.
