中华肾脏病杂志
中華腎髒病雜誌
중화신장병잡지
2002年
5期
331-336
,共6页
郭群英%叶任高%黄凌虹%郑树森%汪涛
郭群英%葉任高%黃凌虹%鄭樹森%汪濤
곽군영%협임고%황릉홍%정수삼%왕도
腹膜透析%透明质酸
腹膜透析%透明質痠
복막투석%투명질산
目的明确哪一种透明质酸合成酶是人腹膜间皮细胞合成透明质酸及形成细胞外基质/胞衣样结构的主要酶.方法分离培养人腹膜间皮细胞,以半定量RT-PCR法检测其3种透明质酸合成酶HAAS-1、HAS-2、HAS-3 mRNA水平表达情况.明确正常培养人腹膜间皮细胞主要表达HAS-2mRNA和微量HAS-3 mRNA后,设计HAS-2的反义寡核苷酸序列,以脂质体介导法将其转入正常培养的人腹膜间皮细胞.转染前(O h)、转染后8、24、48 h以RT-RCR法观察HAS-2 mRNA表达情况,并以微粒排除法观察细胞衣样结构面积变化.结果转染后8和24 h,HAS-2 mRNA表达分别下降58%和89%(P均＜0.05);转染后48 h HAS-2 mRNA表达已部分恢复至正常表达的25%水平(P＜0.05).相应地,转染后24 h以微粒排除法观察人腹膜间皮细胞细胞外基质/胞衣样结构面积与细胞体面积比值,亦明显减少至几乎完全消失.作为对照的正义序列和逆转序列则无该作用.结论HAS-2是正常培养人腹膜间皮细胞合成透明质酸以及细胞外基质/胞衣样结构形成的关键酶.
目的明確哪一種透明質痠閤成酶是人腹膜間皮細胞閤成透明質痠及形成細胞外基質/胞衣樣結構的主要酶.方法分離培養人腹膜間皮細胞,以半定量RT-PCR法檢測其3種透明質痠閤成酶HAAS-1、HAS-2、HAS-3 mRNA水平錶達情況.明確正常培養人腹膜間皮細胞主要錶達HAS-2mRNA和微量HAS-3 mRNA後,設計HAS-2的反義寡覈苷痠序列,以脂質體介導法將其轉入正常培養的人腹膜間皮細胞.轉染前(O h)、轉染後8、24、48 h以RT-RCR法觀察HAS-2 mRNA錶達情況,併以微粒排除法觀察細胞衣樣結構麵積變化.結果轉染後8和24 h,HAS-2 mRNA錶達分彆下降58%和89%(P均＜0.05);轉染後48 h HAS-2 mRNA錶達已部分恢複至正常錶達的25%水平(P＜0.05).相應地,轉染後24 h以微粒排除法觀察人腹膜間皮細胞細胞外基質/胞衣樣結構麵積與細胞體麵積比值,亦明顯減少至幾乎完全消失.作為對照的正義序列和逆轉序列則無該作用.結論HAS-2是正常培養人腹膜間皮細胞閤成透明質痠以及細胞外基質/胞衣樣結構形成的關鍵酶.
목적명학나일충투명질산합성매시인복막간피세포합성투명질산급형성세포외기질/포의양결구적주요매.방법분리배양인복막간피세포,이반정량RT-PCR법검측기3충투명질산합성매HAAS-1、HAS-2、HAS-3 mRNA수평표체정황.명학정상배양인복막간피세포주요표체HAS-2mRNA화미량HAS-3 mRNA후,설계HAS-2적반의과핵감산서렬,이지질체개도법장기전입정상배양적인복막간피세포.전염전(O h)、전염후8、24、48 h이RT-RCR법관찰HAS-2 mRNA표체정황,병이미립배제법관찰세포의양결구면적변화.결과전염후8화24 h,HAS-2 mRNA표체분별하강58%화89%(P균＜0.05);전염후48 h HAS-2 mRNA표체이부분회복지정상표체적25%수평(P＜0.05).상응지,전염후24 h이미립배제법관찰인복막간피세포세포외기질/포의양결구면적여세포체면적비치,역명현감소지궤호완전소실.작위대조적정의서렬화역전서렬칙무해작용.결론HAS-2시정상배양인복막간피세포합성투명질산이급세포외기질/포의양결구형성적관건매.
