第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2004年
1期
57-60
,共4页
曹延兵%叶治家%彭家和%巩燕%黄刚
曹延兵%葉治傢%彭傢和%鞏燕%黃剛
조연병%협치가%팽가화%공연%황강
PPARγ%cDNA%克隆%表达
PPARγ%cDNA%剋隆%錶達
PPARγ%cDNA%극륭%표체
目的克隆中国人的PPARγ2 cDNA,并在大肠杆菌中进行表达纯化.方法从正常人面部脂肪组织分离总RNA,采用RT-PCR及序列测定等方法获得人的PPARγ2 cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达;在N末端融合了6×His纯化标签的表达产物进行Western blot分析和用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析.结果获得了正常中国人的PPARγ2 cDNA,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-PPARγ2;Western blot结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量为56×103的PPARγ2目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA离子交换树脂纯化,PPARγ2蛋白的纯度大于90%以上.结论克隆得到正常中国人PPARγ2 cDNA的序列与Genebank报道的序列一致,并且在E.coli中成功表达和纯化了PPARγ2蛋白.此研究为后续PPARγ2功能活性和配体的筛选实验奠定了基础.
目的剋隆中國人的PPARγ2 cDNA,併在大腸桿菌中進行錶達純化.方法從正常人麵部脂肪組織分離總RNA,採用RT-PCR及序列測定等方法穫得人的PPARγ2 cDNA,然後剋隆至原覈錶達載體pET28a,轉化至大腸桿菌BL21(DE3),IPTG進行誘導錶達;在N末耑融閤瞭6×His純化標籤的錶達產物進行Western blot分析和用Ni2+-NTA離子交換樹脂進行純化;純化蛋白進行SDS-PAGE純度分析.結果穫得瞭正常中國人的PPARγ2 cDNA,併成功構建瞭高效原覈錶達質粒pET28a-PPARγ2;Western blot結果錶明,經IPTG誘導,在大腸桿菌中錶達瞭分子量為56×103的PPARγ2目的蛋白;錶達產物經Ni2+-NTA離子交換樹脂純化,PPARγ2蛋白的純度大于90%以上.結論剋隆得到正常中國人PPARγ2 cDNA的序列與Genebank報道的序列一緻,併且在E.coli中成功錶達和純化瞭PPARγ2蛋白.此研究為後續PPARγ2功能活性和配體的篩選實驗奠定瞭基礎.
목적극륭중국인적PPARγ2 cDNA,병재대장간균중진행표체순화.방법종정상인면부지방조직분리총RNA,채용RT-PCR급서렬측정등방법획득인적PPARγ2 cDNA,연후극륭지원핵표체재체pET28a,전화지대장간균BL21(DE3),IPTG진행유도표체;재N말단융합료6×His순화표첨적표체산물진행Western blot분석화용Ni2+-NTA리자교환수지진행순화;순화단백진행SDS-PAGE순도분석.결과획득료정상중국인적PPARγ2 cDNA,병성공구건료고효원핵표체질립pET28a-PPARγ2;Western blot결과표명,경IPTG유도,재대장간균중표체료분자량위56×103적PPARγ2목적단백;표체산물경Ni2+-NTA리자교환수지순화,PPARγ2단백적순도대우90%이상.결론극륭득도정상중국인PPARγ2 cDNA적서렬여Genebank보도적서렬일치,병차재E.coli중성공표체화순화료PPARγ2단백.차연구위후속PPARγ2공능활성화배체적사선실험전정료기출.
