免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2004年
2期
100-102,109
,共4页
姜曼%万瑛%周镜然%邹丽云%韩俊峰%吴玉章
薑曼%萬瑛%週鏡然%鄒麗雲%韓俊峰%吳玉章
강만%만영%주경연%추려운%한준봉%오옥장
MHCⅠ类分子%绿色荧光蛋白%融合蛋白%重组表达
MHCⅠ類分子%綠色熒光蛋白%融閤蛋白%重組錶達
MHCⅠ류분자%록색형광단백%융합단백%중조표체
目的构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子Kb(Kb-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达.方法RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子Kb cDNA,克隆入真核表达载体pGFP-N1中EGFP分子的上游,脂质体转染COS-7细胞,G418加压筛选获得抗性重组细胞.荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况.结果分子克隆的方法获得了预期的重组质粒,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误,转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光,特征性地分布于细胞质膜,及核周、膜下的囊泡结构中.结论所构建的Kb-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征,为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型.
目的構建綠色熒光蛋白標記的MHCⅠ類分子Kb(Kb-EGFP融閤蛋白),併在哺乳動物細胞中穫得功能性錶達.方法RT-PCR的方法穫得小鼠MHCⅠ類分子Kb cDNA,剋隆入真覈錶達載體pGFP-N1中EGFP分子的上遊,脂質體轉染COS-7細胞,G418加壓篩選穫得抗性重組細胞.熒光顯微鏡下觀測重組分子的錶達及胞內定位情況.結果分子剋隆的方法穫得瞭預期的重組質粒,質粒經DNA序列測定證實閱讀框無誤,轉染COS-7細胞後的抗性剋隆胞漿內可以觀察到明亮的綠色熒光,特徵性地分佈于細胞質膜,及覈週、膜下的囊泡結構中.結論所構建的Kb-EGFP融閤蛋白在細胞內錶達後具有MHCⅠ類分子的特徵性分佈,提示該重組分子具有野生型MHCⅠ類分子的生物學特性和胞內分佈特徵,為進一步深入研究MHCⅠ類分子胞內動態分佈及分子功能提供瞭良好的細胞和分子模型.
목적구건록색형광단백표기적MHCⅠ류분자Kb(Kb-EGFP융합단백),병재포유동물세포중획득공능성표체.방법RT-PCR적방법획득소서MHCⅠ류분자Kb cDNA,극륭입진핵표체재체pGFP-N1중EGFP분자적상유,지질체전염COS-7세포,G418가압사선획득항성중조세포.형광현미경하관측중조분자적표체급포내정위정황.결과분자극륭적방법획득료예기적중조질립,질립경DNA서렬측정증실열독광무오,전염COS-7세포후적항성극륭포장내가이관찰도명량적록색형광,특정성지분포우세포질막,급핵주、막하적낭포결구중.결론소구건적Kb-EGFP융합단백재세포내표체후구유MHCⅠ류분자적특정성분포,제시해중조분자구유야생형MHCⅠ류분자적생물학특성화포내분포특정,위진일보심입연구MHCⅠ류분자포내동태분포급분자공능제공료량호적세포화분자모형.
