细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2005年
2期
206-210
,共5页
张梅英%李华%董婉维%秦英%杨葳%王禄增%王太一
張梅英%李華%董婉維%秦英%楊葳%王祿增%王太一
장매영%리화%동완유%진영%양위%왕록증%왕태일
NIH3T3细胞%转染%G418%潮霉素B%ES细胞
NIH3T3細胞%轉染%G418%潮黴素B%ES細胞
NIH3T3세포%전염%G418%조매소B%ES세포
通过脂质体转染的方法,先后将含有neo基因的质粒pWL/neo和含有潮霉素基因的质粒导入NIH3T3细胞中,利用G418和潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,经500μg/ml的G418和300μg/ma潮霉素B压力筛选后,获得了具有G418和潮霉素B双重抗性细胞克隆.抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,用PCR法特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段.生长在双抗NIH3T3细胞饲养层上ES细胞基本保持正常ES细胞特征,成功地培育了G418和潮霉素双重抗性的NIH3T3细胞,为进行pTet-on和pTRE-H-Insulin目的基因电转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础.
通過脂質體轉染的方法,先後將含有neo基因的質粒pWL/neo和含有潮黴素基因的質粒導入NIH3T3細胞中,利用G418和潮黴素B的藥物選擇特性,對轉染細胞進行壓力篩選,經500μg/ml的G418和300μg/ma潮黴素B壓力篩選後,穫得瞭具有G418和潮黴素B雙重抗性細胞剋隆.抗性NIH3T3細胞的形態和生長速度與正常NIH3T3細胞沒有差異,用PCR法特異性覈苷痠引物檢測抗性細胞基因組DNA,可以擴增齣對應的覈苷痠片段.生長在雙抗NIH3T3細胞飼養層上ES細胞基本保持正常ES細胞特徵,成功地培育瞭G418和潮黴素雙重抗性的NIH3T3細胞,為進行pTet-on和pTRE-H-Insulin目的基因電轉染ES細胞的暘性細胞剋隆篩選打下瞭基礎.
통과지질체전염적방법,선후장함유neo기인적질립pWL/neo화함유조매소기인적질립도입NIH3T3세포중,이용G418화조매소B적약물선택특성,대전염세포진행압력사선,경500μg/ml적G418화300μg/ma조매소B압력사선후,획득료구유G418화조매소B쌍중항성세포극륭.항성NIH3T3세포적형태화생장속도여정상NIH3T3세포몰유차이,용PCR법특이성핵감산인물검측항성세포기인조DNA,가이확증출대응적핵감산편단.생장재쌍항NIH3T3세포사양층상ES세포기본보지정상ES세포특정,성공지배육료G418화조매소쌍중항성적NIH3T3세포,위진행pTet-on화pTRE-H-Insulin목적기인전전염ES세포적양성세포극륭사선타하료기출.
