CAJ | 학술논문

利用RT-PCR技术扩增出草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的leptin基因,将leptin基因克隆至真核表达载体pPIC9K,电穿孔转化GS115菌株,经G418筛选和甲醇诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳和Western blot分析.结果表明,草鱼leptin基因cDNA序列由438个核苷酸组成,编码146个氨基酸组成的多肽(GenBank登陆号AY551335),与鲤鱼(Cyprinus carpio)leptin基因相比,核苷酸和氨基酸的同源性为99%;与人、猪和鼠相比,核苷酸同源性分别为84%、86%和95%,氯基酸的同源性分别为84%、82%和96%;与河豚(Takifugu rubripes)相比,氨基酸具有较大的差异,仅有9%的同源性,表明leptin在物种的进化上具有一定的差异;实现了草鱼leptin基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达,表达蛋白的分子量约为16 kD,Western blot分析表明,表达产物具有一定的免疫学活性.
이용RT-PCR기술확증출초어(Ctenopharyngodon idellus)적leptin기인,장leptin기인극륭지진핵표체재체pPIC9K,전천공전화GS115균주,경G418사선화갑순유도후,대표체산물진행SDS-PAGE경지당응효전영화Western blot분석.결과표명,초어leptin기인cDNA서렬유438개핵감산조성,편마146개안기산조성적다태(GenBank등륙호AY551335),여리어(Cyprinus carpio)leptin기인상비,핵감산화안기산적동원성위99%;여인、저화서상비,핵감산동원성분별위84%、86%화95%,록기산적동원성분별위84%、82%화96%;여하돈(Takifugu rubripes)상비,안기산구유교대적차이,부유9%적동원성,표명leptin재물충적진화상구유일정적차이;실현료초어leptin기인재필적효모(Pichia pastoris)중적표체,표체단백적분자량약위16 kD,Western blot분석표명,표체산물구유일정적면역학활성.