稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
은정표체저수포병병독P1기인적PK-15세포계적건립
Establishment of a Stable PK-15 Cell Line Expressing the P1 Gene of Swine Vesicular Disease Virus
  • 万方数据
    畜牧兽医学报 축목수의학보

    2008年 4期 478-482 ,共5页

    田宏%吴锦艳%龚真莉%郑海学%孙世琪%尚佑军%刘湘涛%谢庆阁

    전굉%오금염%공진리%정해학%손세기%상우군%류상도%사경각

    猪水疱病病毒P1基因%重组逆转录病毒载体%PK-15细胞%基因表达 豬水皰病病毒P1基因%重組逆轉錄病毒載體%PK-15細胞%基因錶達
    저수포병병독P1기인%중조역전록병독재체%PK-15세포%기인표체
    从猪水疱病全长感染性 cDNA 中,应用 PCR 技术扩增到 SVDV 结构蛋白 P1 基因,并在目的片段的 5'端引入 Kozak 序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体 pBABE puro.经 PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒.将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体 pVSV-G 共转染 GP2-293 细胞,收获假型病毒,在 Polybrene 的介导下感染 PK-15 细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有 SVDV P1 蛋白表达,而且表达的蛋白可被 SVD 阳性血清所识别;同时应用 PCR 技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到 SVD P1 基因.表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达 SVD P1 蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性.
    종저수포병전장감염성 cDNA 중,응용 PCR 기술확증도 SVDV 결구단백 P1 기인,병재목적편단적 5'단인입 Kozak 서렬(Kozak,1987),정향극륭우역전록병독재체 pBABE puro.경 PCR、매절화서렬분석감정,획득양성중조질립.장해중조질립여수포성구염병독재체 pVSV-G 공전염 GP2-293 세포,수획가형병독,재 Polybrene 적개도하감염 PK-15 세포,표령매소사선양성세포극륭.면역형광련속검측양성극륭전대세포,발현재불동대차적세포중균유 SVDV P1 단백표체,이차표체적단백가피 SVD 양성혈청소식별;동시응용 PCR 기술,가종체외반복전대양성세포기인조중확증도 SVD P1 기인.표명본차소사선적양성세포극륭불단능지속은정지표체 SVD P1 단백,이차가휴대외원기인진행전대,구유량호적유전은정성.
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