广东医学院学报
廣東醫學院學報
엄동의학원학보
JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE
2010年
5期
489-492
,共4页
李祥勇%张美红%林观平%周克元
李祥勇%張美紅%林觀平%週剋元
리상용%장미홍%림관평%주극원
Bi-1%基因沉默%RNAi%慢病毒载体
Bi-1%基因沉默%RNAi%慢病毒載體
Bi-1%기인침묵%RNAi%만병독재체
目的 构建靶向人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重组载体.方法 借助siRNA设计工具,并结合文献资料选取Bi-1基因编码序列中有效的干扰靶点,根据连接载体中的酶切位点自行设计并人工合成干扰靶点的一对反义脱氧寡核苷酸链,先定向克隆到pU6载体(pU6-Bi-1-shRNA),再经双酶切后克隆到慢病毒包装质粒LunIG,得到靶向Bi-1基因沉默的慢病毒包装重组质粒LunIG-Bi-1.重组质粒经PCR法进行初筛后,再通过双酶切电泳和目的 基因沉默效果的检测保证插入序列的正确性.结果 靶向沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包装质粒LunIG中.结论 靶向Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包装重组质粒构建成功.
目的 構建靶嚮人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重組載體.方法 藉助siRNA設計工具,併結閤文獻資料選取Bi-1基因編碼序列中有效的榦擾靶點,根據連接載體中的酶切位點自行設計併人工閤成榦擾靶點的一對反義脫氧寡覈苷痠鏈,先定嚮剋隆到pU6載體(pU6-Bi-1-shRNA),再經雙酶切後剋隆到慢病毒包裝質粒LunIG,得到靶嚮Bi-1基因沉默的慢病毒包裝重組質粒LunIG-Bi-1.重組質粒經PCR法進行初篩後,再通過雙酶切電泳和目的 基因沉默效果的檢測保證插入序列的正確性.結果 靶嚮沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包裝質粒LunIG中.結論 靶嚮Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包裝重組質粒構建成功.
목적 구건파향인Bax Inhibitor-1(Bi-1)기인적shRNA만병독중조재체.방법 차조siRNA설계공구,병결합문헌자료선취Bi-1기인편마서렬중유효적간우파점,근거련접재체중적매절위점자행설계병인공합성간우파점적일대반의탈양과핵감산련,선정향극륭도pU6재체(pU6-Bi-1-shRNA),재경쌍매절후극륭도만병독포장질립LunIG,득도파향Bi-1기인침묵적만병독포장중조질립LunIG-Bi-1.중조질립경PCR법진행초사후,재통과쌍매절전영화목적 기인침묵효과적검측보증삽입서렬적정학성.결과 파향침묵Bi-1기인적shRNA서렬성공삽입도만병독포장질립LunIG중.결론 파향Bi-1기인침묵적만병독shRNA포장중조질립구건성공.
