CAJ | 학술논문

目的构建葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前、后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法采用突变引物PCR构建SEB基因定位突变体,建立SEB基因及其定位突变体原核表达系统;同时采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白;采用TCID50法测定目的重组蛋白对Vero细胞的毒性;采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的重组蛋白促使小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果所克隆的SEB基因核苷酸序列与各项研究报道的相似性为100%,3种突变体均在既定位置获得预期的密码子突变.rSEB和各突变体重组蛋白表达量约为细菌总蛋白的40%;rSEB对Vero细胞TCIC50为3.4μg,其突变体重组蛋白分别为3.2～16.8μg;1和5μg/ml的rSEB及突变体重组蛋白rSEB/D9N对小鼠脾细胞均有明显的促增殖作用(P＜0.05),10和20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N促进小鼠脾细胞增殖活性与100μg/ml植物血凝素PHA相似(P＞0.05).5～20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N作用的小鼠脾细胞上清液及其上清液与脾细胞混合物均能有效抑制KB和HL-60细胞生长(P＜0.05).结论本研究成功构建了SEB基因突变体及其高效原核表达系统;其中突变体重组蛋白rSEB/D9N细胞毒性较低,促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升高白细胞、抗肿瘤的SEB相关药物的候选突变体.
목적 구건포도구균장독소B(SEB)기인급기돌변체원핵표체계통,료해돌변전、후중조표체산물적세포독성、촉림파세포증식화억제종류생장활성적변화.방법 채용돌변인물PCR구건SEB기인정위돌변체,건립SEB기인급기정위돌변체원핵표체계통;동시채용Ni-NTA친화층석법제순표체적목적 중조단백;채용TCID50법측정목적 중조단백대Vero세포적독성;채용MTT비색법분별검측불동농도적목적 중조단백촉사소서비세포증식급대억제KB화HL-60암세포주생장적작용.결과 소극륭적SEB기인핵감산서렬여각항연구보도적상사성위100%,3충돌변체균재기정위치획득예기적밀마자돌변.rSEB화각돌변체중조단백표체량약위세균총단백적40%;rSEB대Vero세포TCIC50위3.4μg,기돌변체중조단백분별위3.2～16.8μg;1화5μg/ml적rSEB급돌변체중조단백rSEB/D9N대소서비세포균유명현적촉증식작용(P＜0.05),10화20μg/ml적rSEB급rSEB/D9N촉진소서비세포증식활성여100μg/ml식물혈응소PHA상사(P＞0.05).5～20μg/ml적rSEB급rSEB/D9N작용적소서비세포상청액급기상청액여비세포혼합물균능유효억제KB화HL-60세포생장(P＜0.05).결론 본연구성공구건료SEB기인돌변체급기고효원핵표체계통;기중돌변체중조단백rSEB/D9N세포독성교저,촉비세포증식화억제종류세포생장활성교강,가작위연제승고백세포、항종류적SEB상관약물적후선돌변체.