弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化
궁형충치밀과립단백4적원핵세포표체여순화
Expression and Purification of Toxoplasma gondii GRA4 Gene in Prokaryotic System
  • 万方数据
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志 중국기생충학여기생충병잡지
    CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
    2005年 6期 419-423 ,共5页

    林绮萍%吴少庭%翁亚彪%雷明军%潘晖榕%袁仕善%温见翔%秦莉%黄达娜%张仁利%高世同

    림기평%오소정%옹아표%뢰명군%반휘용%원사선%온견상%진리%황체나%장인리%고세동

    弓形虫%致密颗粒蛋白4%原核细胞%基因表达%蛋白纯化 弓形蟲%緻密顆粒蛋白4%原覈細胞%基因錶達%蛋白純化
    궁형충%치밀과립단백4%원핵세포%기인표체%단백순화
    目的构建弓形虫致密颗粒蛋白4(GRA4)的pET原核细胞表达系统,并对其表达产物进行纯化及其免疫学活性测定.方法利用PCR扩增弓形虫GRA4基因片段,定向亚克隆入原核细胞表达载体pET-23a(+),转化大肠埃希菌(E.coli BL21 DE3),以组氨酸结合柱亲和层析法纯化表达产物,并对其进行抗原活性分析.将纯化的重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其特异性抗体滴度.结果成功构建了弓形虫pET-GRA4原核细胞表达系统,其表达产物相对分子质量(Mr)约为40 000,主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白能被人工感染弓形虫RH株速殖子的兔血清识别.免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性IgG抗体.结论利用pET原核细胞表达系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,该蛋白具有一定的免疫学活性.
    목적구건궁형충치밀과립단백4(GRA4)적pET원핵세포표체계통,병대기표체산물진행순화급기면역학활성측정.방법이용PCR확증궁형충GRA4기인편단,정향아극륭입원핵세포표체재체pET-23a(+),전화대장애희균(E.coli BL21 DE3),이조안산결합주친화층석법순화표체산물,병대기진행항원활성분석.장순화적중조단백면역소서,용ELISA검측기특이성항체적도.결과성공구건료궁형충pET-GRA4원핵세포표체계통,기표체산물상대분자질량(Mr)약위40 000,주요이포함체형식존재,순화후적중조단백능피인공감염궁형충RH주속식자적토혈청식별.면역소서후가유도산생고적도적특이성IgG항체.결론이용pET원핵세포표체계통성공표체화순화료궁형충GRA4중조단백,해단백구유일정적면역학활성.
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