中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
33期
6521-6524
,共4页
徐芳芹%田美玲%胡丽新%秦建兵%金国华
徐芳芹%田美玲%鬍麗新%秦建兵%金國華
서방근%전미령%호려신%진건병%금국화
银杏内酯%神经生长因子%肝细胞%细胞培养%人胚
銀杏內酯%神經生長因子%肝細胞%細胞培養%人胚
은행내지%신경생장인자%간세포%세포배양%인배
目的:如何培养足够的肝细胞以及应用一些物质、因子从而使其增加分裂、减少凋亡?观察银杏内酯和神经生长因子对体外原代培养的人胚肝细胞增殖、凋亡及相关分泌功能的影响具有临床实用性意义.方法:实验于2005-07/2006-10在南通大学神经生物学研究所完成.①细胞来源:孕14～16周流产胎儿,由南通市妇幼保健院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准.银杏内酯由中国药科大学提供,神经生长因子为Roche公司产品.②实验方法:用非灌流法从人胚肝中分离肝细胞,以DMEM作为培养基,接种于4块24孔培养板中,每两块培养板各接种36孔,12孔/组,细胞3×105/孔.银杏内酯组各孔加入含37.5 g/L银杏内酯和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2 mL,神经生长因子组各孔加入含100 mg/L神经生长因子和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2 mL,空白对照组各孔加入仅含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2 mL.③实验评估:人胚肝细胞原代培养至9 d,倒置显微镜下计数每视野的肝细胞数,同时行MTT试验,并用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况.分别于培养3,6,9 d时收集肝细胞培养液进行白蛋白含量检测.结果:①原代肝细胞生长情况及肝细胞计数:接种12 h后各组肝细胞均已贴壁,3 d后可见由3～5个细胞组成的细胞集落,至9 d时银杏内酯组和神经生长因子组肝细胞已基本铺满孔底,且呈立体生长倾向,空白对照组肝细胞较少,胞间有空隙存在.至培养9 d,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组每视野内肝细胞计数差异有显著性意义(F=12.97,P=0.00).②MTT试验结果:原代肝细胞培养至9 d时,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组吸光度值差异有显著性意义(F=71.90,P=0.00).③肝细胞培养液白蛋白含量:培养3 d时各组细胞培养液的白蛋白含量方差分析无明显差异(F=0.23,P=0.79).培养6,9 d同一时间点组间比较差异有显著性意义(F=11.69,P=0.00;F=9.35,P=0.00).④细胞凋亡情况:银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组凋亡肝细胞百分率分别为11.53%,9.29%,15.27%.结论:银杏内酯和神经生长因子对原代人胚肝细胞的增殖和分泌白蛋白功能均具有促进作用,并抑制细胞凋亡.
目的:如何培養足夠的肝細胞以及應用一些物質、因子從而使其增加分裂、減少凋亡?觀察銀杏內酯和神經生長因子對體外原代培養的人胚肝細胞增殖、凋亡及相關分泌功能的影響具有臨床實用性意義.方法:實驗于2005-07/2006-10在南通大學神經生物學研究所完成.①細胞來源:孕14～16週流產胎兒,由南通市婦幼保健院婦產科提供,產婦及其傢屬均知情同意,實驗經醫學倫理委員會批準.銀杏內酯由中國藥科大學提供,神經生長因子為Roche公司產品.②實驗方法:用非灌流法從人胚肝中分離肝細胞,以DMEM作為培養基,接種于4塊24孔培養闆中,每兩塊培養闆各接種36孔,12孔/組,細胞3×105/孔.銀杏內酯組各孔加入含37.5 g/L銀杏內酯和體積分數為0.1小牛血清的DMEM培養液2 mL,神經生長因子組各孔加入含100 mg/L神經生長因子和體積分數為0.1小牛血清的DMEM培養液2 mL,空白對照組各孔加入僅含體積分數為0.1小牛血清的DMEM培養液2 mL.③實驗評估:人胚肝細胞原代培養至9 d,倒置顯微鏡下計數每視野的肝細胞數,同時行MTT試驗,併用流式細胞儀檢測肝細胞凋亡情況.分彆于培養3,6,9 d時收集肝細胞培養液進行白蛋白含量檢測.結果:①原代肝細胞生長情況及肝細胞計數:接種12 h後各組肝細胞均已貼壁,3 d後可見由3～5箇細胞組成的細胞集落,至9 d時銀杏內酯組和神經生長因子組肝細胞已基本鋪滿孔底,且呈立體生長傾嚮,空白對照組肝細胞較少,胞間有空隙存在.至培養9 d,銀杏內酯組、神經生長因子組、空白對照組每視野內肝細胞計數差異有顯著性意義(F=12.97,P=0.00).②MTT試驗結果:原代肝細胞培養至9 d時,銀杏內酯組、神經生長因子組、空白對照組吸光度值差異有顯著性意義(F=71.90,P=0.00).③肝細胞培養液白蛋白含量:培養3 d時各組細胞培養液的白蛋白含量方差分析無明顯差異(F=0.23,P=0.79).培養6,9 d同一時間點組間比較差異有顯著性意義(F=11.69,P=0.00;F=9.35,P=0.00).④細胞凋亡情況:銀杏內酯組、神經生長因子組、空白對照組凋亡肝細胞百分率分彆為11.53%,9.29%,15.27%.結論:銀杏內酯和神經生長因子對原代人胚肝細胞的增殖和分泌白蛋白功能均具有促進作用,併抑製細胞凋亡.
목적:여하배양족구적간세포이급응용일사물질、인자종이사기증가분렬、감소조망?관찰은행내지화신경생장인자대체외원대배양적인배간세포증식、조망급상관분비공능적영향구유림상실용성의의.방법:실험우2005-07/2006-10재남통대학신경생물학연구소완성.①세포래원:잉14～16주유산태인,유남통시부유보건원부산과제공,산부급기가속균지정동의,실험경의학윤리위원회비준.은행내지유중국약과대학제공,신경생장인자위Roche공사산품.②실험방법:용비관류법종인배간중분리간세포,이DMEM작위배양기,접충우4괴24공배양판중,매량괴배양판각접충36공,12공/조,세포3×105/공.은행내지조각공가입함37.5 g/L은행내지화체적분수위0.1소우혈청적DMEM배양액2 mL,신경생장인자조각공가입함100 mg/L신경생장인자화체적분수위0.1소우혈청적DMEM배양액2 mL,공백대조조각공가입부함체적분수위0.1소우혈청적DMEM배양액2 mL.③실험평고:인배간세포원대배양지9 d,도치현미경하계수매시야적간세포수,동시행MTT시험,병용류식세포의검측간세포조망정황.분별우배양3,6,9 d시수집간세포배양액진행백단백함량검측.결과:①원대간세포생장정황급간세포계수:접충12 h후각조간세포균이첩벽,3 d후가견유3～5개세포조성적세포집락,지9 d시은행내지조화신경생장인자조간세포이기본포만공저,차정입체생장경향,공백대조조간세포교소,포간유공극존재.지배양9 d,은행내지조、신경생장인자조、공백대조조매시야내간세포계수차이유현저성의의(F=12.97,P=0.00).②MTT시험결과:원대간세포배양지9 d시,은행내지조、신경생장인자조、공백대조조흡광도치차이유현저성의의(F=71.90,P=0.00).③간세포배양액백단백함량:배양3 d시각조세포배양액적백단백함량방차분석무명현차이(F=0.23,P=0.79).배양6,9 d동일시간점조간비교차이유현저성의의(F=11.69,P=0.00;F=9.35,P=0.00).④세포조망정황:은행내지조、신경생장인자조、공백대조조조망간세포백분솔분별위11.53%,9.29%,15.27%.결론:은행내지화신경생장인자대원대인배간세포적증식화분비백단백공능균구유촉진작용,병억제세포조망.
