中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
2期
129-133
,共5页
郭小参%崔保安%陈红英%王彦彬%方剑玉%吕晓丽%王东方
郭小參%崔保安%陳紅英%王彥彬%方劍玉%呂曉麗%王東方
곽소삼%최보안%진홍영%왕언빈%방검옥%려효려%왕동방
猪白细胞介素-2%克隆%序列分析%杆状病毒
豬白細胞介素-2%剋隆%序列分析%桿狀病毒
저백세포개소-2%극륭%서렬분석%간상병독
参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序.测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%.与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2.本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础.
參照GenBank髮錶的豬IL-2 cDNA基因序列設計1對引物,將豬脾淋巴細胞在伴刀豆毬蛋白A(Con A)的刺激下體外培養27 h後,提取激活淋巴細胞總RNA,進行反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增,剋隆到pGEM-TEasy載體上併測序.測序結果顯示,剋隆的豬IL-2 cDNA全長為516 bp,開放閱讀框(ORF)包含465 bp,編碼154箇氨基痠,相對分子質量為17 400,等電點為5.27,此cDNA與已報道的豬IL-2同源性為100%.與貓、牛、鷄、犬、鴨、山羊、馬、人、傢鼠等的IL-2基因進行比較分析,覈苷痠同源性分彆為83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.將此IL-2基因亞剋隆到桿狀病毒轉移載體pFastBacDual後穫得瞭重組質粒pFBD-IL2,進而轉化進含穿梭載體Bacmid的感受態細胞DH10Bac中,髮生轉座作用;經抗性及藍白斑篩選得到瞭含豬IL-2基因的重組DNA,將其命名為Bacmid-IL2.本試驗為進一步在昆蟲細胞中錶達豬IL-2基因、開髮研製新型免疫佐劑奠定瞭基礎.
삼조GenBank발표적저IL-2 cDNA기인서렬설계1대인물,장저비림파세포재반도두구단백A(Con A)적자격하체외배양27 h후,제취격활림파세포총RNA,진행반전록-취합매련반응(RT-PCR)확증,극륭도pGEM-TEasy재체상병측서.측서결과현시,극륭적저IL-2 cDNA전장위516 bp,개방열독광(ORF)포함465 bp,편마154개안기산,상대분자질량위17 400,등전점위5.27,차cDNA여이보도적저IL-2동원성위100%.여묘、우、계、견、압、산양、마、인、가서등적IL-2기인진행비교분석,핵감산동원성분별위83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%화61.5%.장차IL-2기인아극륭도간상병독전이재체pFastBacDual후획득료중조질립pFBD-IL2,진이전화진함천사재체Bacmid적감수태세포DH10Bac중,발생전좌작용;경항성급람백반사선득도료함저IL-2기인적중조DNA,장기명명위Bacmid-IL2.본시험위진일보재곤충세포중표체저IL-2기인、개발연제신형면역좌제전정료기출.
