中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2009年
2期
309-314
,共6页
罗建民%李燕%杨琳%刘小军%温树鹏%王福旭%张敬宇%张学军%董作仁
囉建民%李燕%楊琳%劉小軍%溫樹鵬%王福旭%張敬宇%張學軍%董作仁
라건민%리연%양림%류소군%온수붕%왕복욱%장경우%장학군%동작인
甲基化抑制剂%5-氮杂脱氧胞苷%K562细胞%SHP-1基因%白血病%细胞增殖
甲基化抑製劑%5-氮雜脫氧胞苷%K562細胞%SHP-1基因%白血病%細胞增殖
갑기화억제제%5-담잡탈양포감%K562세포%SHP-1기인%백혈병%세포증식
本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据.采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2 μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1 mRNA及蛋白表达水平、P-STAT5蛋白表达变化.结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关.JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%.2 μmol/L的5-aza-CAR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期.5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%.结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡.
本研究探討5-氮雜胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)對K562細胞中抑癌基因SHP-1的轉錄調控作用及對K562細胞增殖凋亡的生物學影響,為尋找腫瘤治療新靶點提供實驗依據.採用MSP方法檢測SHP-1基因甲基化狀態,MTT法檢測不同劑量(0.5,1,2 μmol/L)5-aza-CdR作用K562細胞1,3,5天時對K562細胞存活率的影響,流式細胞術(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天時細胞週期及凋亡率的變化,實時定量PCR(FQ-PCR)和Western blot方法檢測5-aza-CdR處理前後SHP-1 mRNA及蛋白錶達水平、P-STAT5蛋白錶達變化.結果錶明,K562細胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562細胞中SHP-1 mRNA和蛋白重新錶達,而p-JAK2蛋白錶達隨之呈下降趨勢;5-aza-CdR明顯抑製K562細胞增殖,併與藥物濃度及作用時間呈正相關.JAK2特異性抑製劑AG490明顯抑製K562細胞增殖;5-aza-CdR可使K562細胞凋亡率增加,且作用也呈時間依賴性,用藥1,3,5天細胞凋亡率分彆為9.3%,24.2%,37.7%.2 μmol/L的5-aza-CAR處理24小時後,G0/G1期細胞逐漸增多,G2/M期細胞逐漸減少,細胞阻滯在G0/G1期.5-aza-CdR作用1,3,5天時G2/M期細胞比例分彆為30.7%,23.4%,19.3%.結論:特異性甲基化轉移酶抑製劑5-aza-CdR能使K562細胞中沉默的SHP-1基因重新錶達,併可能通過JAK/STAT路徑活化抑製白血病細胞增殖併誘導其凋亡.
본연구탐토5-담잡포감(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)대K562세포중억암기인SHP-1적전록조공작용급대K562세포증식조망적생물학영향,위심조종류치료신파점제공실험의거.채용MSP방법검측SHP-1기인갑기화상태,MTT법검측불동제량(0.5,1,2 μmol/L)5-aza-CdR작용K562세포1,3,5천시대K562세포존활솔적영향,류식세포술(FCM)분석5-aza-CdR작용1,3,5천시세포주기급조망솔적변화,실시정량PCR(FQ-PCR)화Western blot방법검측5-aza-CdR처리전후SHP-1 mRNA급단백표체수평、P-STAT5단백표체변화.결과표명,K562세포중존재SHP-1기인적갑기화,5-aza-CdR작용사K562세포중SHP-1 mRNA화단백중신표체,이p-JAK2단백표체수지정하강추세;5-aza-CdR명현억제K562세포증식,병여약물농도급작용시간정정상관.JAK2특이성억제제AG490명현억제K562세포증식;5-aza-CdR가사K562세포조망솔증가,차작용야정시간의뢰성,용약1,3,5천세포조망솔분별위9.3%,24.2%,37.7%.2 μmol/L적5-aza-CAR처리24소시후,G0/G1기세포축점증다,G2/M기세포축점감소,세포조체재G0/G1기.5-aza-CdR작용1,3,5천시G2/M기세포비례분별위30.7%,23.4%,19.3%.결론:특이성갑기화전이매억제제5-aza-CdR능사K562세포중침묵적SHP-1기인중신표체,병가능통과JAK/STAT로경활화억제백혈병세포증식병유도기조망.
