畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
1期
61-63
,共3页
于新友%沈志强%管宇%南松剑%王金良%肖跃强%唐娜
于新友%瀋誌彊%管宇%南鬆劍%王金良%肖躍彊%唐娜
우신우%침지강%관우%남송검%왕금량%초약강%당나
猪繁殖与呼吸综合征病毒%ORF5基因%重组腺病毒
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%ORF5基因%重組腺病毒
저번식여호흡종합정병독%ORF5기인%중조선병독
克隆PRRSV HN25株ORF5基因,测序并进行序列分析.结果显示ORF5基因编码区长603 bp,编码200个氨基酸,与国内外VR-2332株、LV株和CH-1a株OKF5基因的核酸序列同源性分别为99.0%,63.8%和91.4%,而推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%,58.8%和90.5%.构建含ORF5基因的重组腺病毒穿梭质粒,PmeⅠ酶切线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,同源重组后筛选重组腺病毒质粒,经PacⅠ酶切后转染293A细胞进行包装,获得重组腺病毒.通过PCR鉴定重组腺病毒含有ORF5基因,Western blot检测的结果表明PRRSV ORF5基因在293A细胞内获得表达.
剋隆PRRSV HN25株ORF5基因,測序併進行序列分析.結果顯示ORF5基因編碼區長603 bp,編碼200箇氨基痠,與國內外VR-2332株、LV株和CH-1a株OKF5基因的覈痠序列同源性分彆為99.0%,63.8%和91.4%,而推導的氨基痠序列同源性分彆為98.0%,58.8%和90.5%.構建含ORF5基因的重組腺病毒穿梭質粒,PmeⅠ酶切線性化後,轉化含有腺病毒骨架載體pAdeasy-1的大腸桿菌BJ5183感受態細胞,同源重組後篩選重組腺病毒質粒,經PacⅠ酶切後轉染293A細胞進行包裝,穫得重組腺病毒.通過PCR鑒定重組腺病毒含有ORF5基因,Western blot檢測的結果錶明PRRSV ORF5基因在293A細胞內穫得錶達.
극륭PRRSV HN25주ORF5기인,측서병진행서렬분석.결과현시ORF5기인편마구장603 bp,편마200개안기산,여국내외VR-2332주、LV주화CH-1a주OKF5기인적핵산서렬동원성분별위99.0%,63.8%화91.4%,이추도적안기산서렬동원성분별위98.0%,58.8%화90.5%.구건함ORF5기인적중조선병독천사질립,PmeⅠ매절선성화후,전화함유선병독골가재체pAdeasy-1적대장간균BJ5183감수태세포,동원중조후사선중조선병독질립,경PacⅠ매절후전염293A세포진행포장,획득중조선병독.통과PCR감정중조선병독함유ORF5기인,Western blot검측적결과표명PRRSV ORF5기인재293A세포내획득표체.
