CAJ | 학술논문

目的评价磁珠分离纯化技术(简称磁珠法)提取核酸的重复性、提取效率一致性、线性范围、灵敏度及抗干扰性,初步探讨其在实时荧光定量PCR检测HBV DNA中的应用价值.方法采用磁珠法提取HBV DNA log值分别为4.16,5.23和7.04的质控血清进行重复性试验,HBV DNA阳性血清10倍梯度稀释的系列标本评价其提取效率一致性,HBV DNA强阳性血清作10倍系列稀释后检测其线性范围,HBV DNA标准血清与含干扰成分(溶血、黄疸和脂血)的HBV DNA 阴性血清,按4∶0,3∶1,2∶2,1∶3和0∶4比例分别混合成5个不同浓度标本用于干扰试验.以提取方法为沉淀煮沸法的PCR 荧光诊断试剂作对照,应用磁珠法及配套扩增试剂检测288份乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,并比较测定结果.结果磁珠法批内和批间平均变异系数分别为3.66%和4.75%;HBV DNA含量不同的血清提取效率均在98%以上;在1.28×102IU/L～1.28×109IU/L之间有良好的线性关系;最低检出限为60.5 IU/L;不同浓度的黄疸和脂血对扩增曲线和实验结果无明显影响;血清中血红蛋白浓度至50 g/L时,HBV DNA结果相差约0.5～1.0个数量级.磁珠法和沉淀煮沸法的阳性率分别为88.19%和82.64%.当沉淀煮沸法检测结果log值处在2.699～4.000之间时,两法检测相应标本结果差异有统计学意义.结论磁珠法高效、快速和易于自动化,应用于HBV DNA检测对乙型肝炎患者的临床诊断和疗效监测将有十分重要的意义.
목적 평개자주분리순화기술(간칭자주법)제취핵산적중복성、제취효솔일치성、선성범위、령민도급항간우성,초보탐토기재실시형광정량PCR검측HBV DNA중적응용개치.방법 채용자주법제취HBV DNA log치분별위4.16,5.23화7.04적질공혈청진행중복성시험,HBV DNA양성혈청10배제도희석적계렬표본평개기제취효솔일치성,HBV DNA강양성혈청작10배계렬희석후검측기선성범위,HBV DNA표준혈청여함간우성분(용혈、황달화지혈)적HBV DNA 음성혈청,안4∶0,3∶1,2∶2,1∶3화0∶4비례분별혼합성5개불동농도표본용우간우시험.이제취방법위침정자비법적PCR 형광진단시제작대조,응용자주법급배투확증시제검측288빈을형간염환자혈청HBV DNA함량,병비교측정결과.결과 자주법비내화비간평균변이계수분별위3.66%화4.75%;HBV DNA함량불동적혈청제취효솔균재98%이상;재1.28×102IU/L～1.28×109IU/L지간유량호적선성관계;최저검출한위60.5 IU/L;불동농도적황달화지혈대확증곡선화실험결과무명현영향;혈청중혈홍단백농도지50 g/L시,HBV DNA결과상차약0.5～1.0개수량급.자주법화침정자비법적양성솔분별위88.19%화82.64%.당침정자비법검측결과log치처재2.699～4.000지간시,량법검측상응표본결과차이유통계학의의.결론 자주법고효、쾌속화역우자동화,응용우HBV DNA검측대을형간염환자적림상진단화료효감측장유십분중요적의의.