哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
3期
203-206
,共4页
郝雪微%李淑珍%吕鑫钰%朱大岭
郝雪微%李淑珍%呂鑫鈺%硃大嶺
학설미%리숙진%려흠옥%주대령
冠心病%生物标志物%原核表达
冠心病%生物標誌物%原覈錶達
관심병%생물표지물%원핵표체
目的 重组及表达对氧磷脂酶PON1的融合蛋白,为进一步制备相应单克隆抗体作准备,为建立一种冠心病辅助诊断方法奠定基础.方法 以成人肝cDNA文库为模板,应用PCR技术扩增出PON1基因,将其分别与带有HIS标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接,转化人DH5α菌中进行克隆并测序鉴定.进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达PON1融合蛋白(分别含有HIS、GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 以成人肝cDNA文库为模板经PCR扩增后得到一条234 bp的DNA片段,经测序鉴定为PON1基因序列;并在大肠杆菌中实现了包涵体形式的表达,经Western blot鉴定为PON1融合蛋白.结论 采用原核表达方法可获得高纯度的PON1融合蛋白,为进一步制备相应的单克隆抗体和开发PON1诊断试剂盒打下基础,为冠心病的诊断开辟新途径.
目的 重組及錶達對氧燐脂酶PON1的融閤蛋白,為進一步製備相應單剋隆抗體作準備,為建立一種冠心病輔助診斷方法奠定基礎.方法 以成人肝cDNA文庫為模闆,應用PCR技術擴增齣PON1基因,將其分彆與帶有HIS標籤的pET-32a及GST標籤的pGEX-4T-1載體連接,轉化人DH5α菌中進行剋隆併測序鑒定.進一步構建錶達體繫,用異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,最終在BL21菌中錶達PON1融閤蛋白(分彆含有HIS、GST-Tag),併進行SDS-PAGE及Western blot鑒定.結果 以成人肝cDNA文庫為模闆經PCR擴增後得到一條234 bp的DNA片段,經測序鑒定為PON1基因序列;併在大腸桿菌中實現瞭包涵體形式的錶達,經Western blot鑒定為PON1融閤蛋白.結論 採用原覈錶達方法可穫得高純度的PON1融閤蛋白,為進一步製備相應的單剋隆抗體和開髮PON1診斷試劑盒打下基礎,為冠心病的診斷開闢新途徑.
목적 중조급표체대양린지매PON1적융합단백,위진일보제비상응단극륭항체작준비,위건립일충관심병보조진단방법전정기출.방법 이성인간cDNA문고위모판,응용PCR기술확증출PON1기인,장기분별여대유HIS표첨적pET-32a급GST표첨적pGEX-4T-1재체련접,전화인DH5α균중진행극륭병측서감정.진일보구건표체체계,용이병기β-D-류대반유당감(IPTG)유도,최종재BL21균중표체PON1융합단백(분별함유HIS、GST-Tag),병진행SDS-PAGE급Western blot감정.결과 이성인간cDNA문고위모판경PCR확증후득도일조234 bp적DNA편단,경측서감정위PON1기인서렬;병재대장간균중실현료포함체형식적표체,경Western blot감정위PON1융합단백.결론 채용원핵표체방법가획득고순도적PON1융합단백,위진일보제비상응적단극륭항체화개발PON1진단시제합타하기출,위관심병적진단개벽신도경.
