中华显微外科杂志
中華顯微外科雜誌
중화현미외과잡지
Chinese Journal of Microsurgery
2010年
2期
143-145
,共3页
卢向东%郭庆华%刘强%李平%韩树峰%吴斗%孙海彪
盧嚮東%郭慶華%劉彊%李平%韓樹峰%吳鬥%孫海彪
로향동%곽경화%류강%리평%한수봉%오두%손해표
骨髓基质干细胞%骨形态发生蛋白-2%基因转染%组织工程骨
骨髓基質榦細胞%骨形態髮生蛋白-2%基因轉染%組織工程骨
골수기질간세포%골형태발생단백-2%기인전염%조직공정골
目的 用转基因干细胞在体外构建组织工程骨.方法 用携带有人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒感染骨髓基质干细胞(BMSCs)后接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)支架.荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;RT-PCR、ELISA和Western-blot用于基因转染的表达检测;流式细胞仪检测细胞增殖;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况;ALP活性检测成骨能力.结果 慢病毒24 h对BMSCs的转染率约为90%;RT-PCR检测到BMP-2阳性表达,与实际值1191 bp基本一致;ELIISA检测24 h BMP-2蛋白含量为(148.2±21.6)pg/ml;流式细胞仪检测到细胞S期比例增加;ALP活性检测基因转染组明显强于对照组(P＜0.05);扫描电镜见细胞在nHAC/PLA支架上粘附生长良好;第8周时Western-blot仍可检测到BMP-2在相对分子质量26×103处出现阳性条带.结论 BMP-2基因可在BMSCs稳定表达并诱导其向成骨分化,与nHAC/PLA复合培养可用于组织工程骨构建.
目的 用轉基因榦細胞在體外構建組織工程骨.方法 用攜帶有人骨形態髮生蛋白-2(BMP-2)和增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)的慢病毒感染骨髓基質榦細胞(BMSCs)後接種于納米羥基燐灰石/膠原/聚乳痠(nHAC/PLA)支架.熒光顯微鏡下觀察eGFP錶達,判斷感染效率;RT-PCR、ELISA和Western-blot用于基因轉染的錶達檢測;流式細胞儀檢測細胞增殖;掃描電鏡觀察細胞在支架材料中的黏附、生長狀況;ALP活性檢測成骨能力.結果 慢病毒24 h對BMSCs的轉染率約為90%;RT-PCR檢測到BMP-2暘性錶達,與實際值1191 bp基本一緻;ELIISA檢測24 h BMP-2蛋白含量為(148.2±21.6)pg/ml;流式細胞儀檢測到細胞S期比例增加;ALP活性檢測基因轉染組明顯彊于對照組(P＜0.05);掃描電鏡見細胞在nHAC/PLA支架上粘附生長良好;第8週時Western-blot仍可檢測到BMP-2在相對分子質量26×103處齣現暘性條帶.結論 BMP-2基因可在BMSCs穩定錶達併誘導其嚮成骨分化,與nHAC/PLA複閤培養可用于組織工程骨構建.
목적 용전기인간세포재체외구건조직공정골.방법 용휴대유인골형태발생단백-2(BMP-2)화증강형록색형광단백(eGFP)적만병독감염골수기질간세포(BMSCs)후접충우납미간기린회석/효원/취유산(nHAC/PLA)지가.형광현미경하관찰eGFP표체,판단감염효솔;RT-PCR、ELISA화Western-blot용우기인전염적표체검측;류식세포의검측세포증식;소묘전경관찰세포재지가재료중적점부、생장상황;ALP활성검측성골능력.결과 만병독24 h대BMSCs적전염솔약위90%;RT-PCR검측도BMP-2양성표체,여실제치1191 bp기본일치;ELIISA검측24 h BMP-2단백함량위(148.2±21.6)pg/ml;류식세포의검측도세포S기비례증가;ALP활성검측기인전염조명현강우대조조(P＜0.05);소묘전경견세포재nHAC/PLA지가상점부생장량호;제8주시Western-blot잉가검측도BMP-2재상대분자질량26×103처출현양성조대.결론 BMP-2기인가재BMSCs은정표체병유도기향성골분화,여nHAC/PLA복합배양가용우조직공정골구건.
