中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2006年
2期
38-41
,共4页
江永珍%张明程%田瑞光%鲁健%张文英%毕胜利
江永珍%張明程%田瑞光%魯健%張文英%畢勝利
강영진%장명정%전서광%로건%장문영%필성리
δ肝炎病毒%抗原%基因%表达的序列标记
δ肝炎病毒%抗原%基因%錶達的序列標記
δ간염병독%항원%기인%표체적서렬표기
目的利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原(HDAg)重组表达质粒(pRSETB-HDAg),转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达.表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性.结果重组HDAg稀释1000倍(10 ng/ml)仍与抗体有较强的反应.经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96.15%(25/26份)外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率.结论成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒(pRSETB-HDAg),在原核细胞获得稳定高效表达,EIA 检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查.
目的利用含T7啟動子和His純化標籤pRSET B質粒構建丁型肝炎病毒抗原(HDAg)重組錶達質粒(pRSETB-HDAg),轉化宿主菌,錶達併純化,穫得生物活性高抗原性彊的基因工程重組抗原.方法將中國河南株HDAg基因片段插入pRSET B錶達質粒,轉化BL21宿主菌,經IPTG誘導錶達.錶達產物經Chelating親和層析純化後,採用EIA方法分析HDAg的抗原性.結果重組HDAg稀釋1000倍(10 ng/ml)仍與抗體有較彊的反應.經與美國HDAg和華美公司生產的HDV診斷試劑同時檢測26份HDV暘性參比血清,三者結果比較,除美國抗原漏檢1份,檢齣率為96.15%(25/26份)外,病毒CDC和華美試劑均無漏檢,檢齣率為100%,三者檢測結果具有很高的符閤率.結論成功構建瞭丁型肝炎病毒抗原重組錶達質粒(pRSETB-HDAg),在原覈細胞穫得穩定高效錶達,EIA 檢測證明HDAg抗原性好,可用于組裝HDV診斷試劑,用于臨床丁型肝炎患者的診斷和我國丁型肝炎病毒感染流行病學的調查.
목적이용함T7계동자화His순화표첨pRSET B질립구건정형간염병독항원(HDAg)중조표체질립(pRSETB-HDAg),전화숙주균,표체병순화,획득생물활성고항원성강적기인공정중조항원.방법장중국하남주HDAg기인편단삽입pRSET B표체질립,전화BL21숙주균,경IPTG유도표체.표체산물경Chelating친화층석순화후,채용EIA방법분석HDAg적항원성.결과중조HDAg희석1000배(10 ng/ml)잉여항체유교강적반응.경여미국HDAg화화미공사생산적HDV진단시제동시검측26빈HDV양성삼비혈청,삼자결과비교,제미국항원루검1빈,검출솔위96.15%(25/26빈)외,병독CDC화화미시제균무루검,검출솔위100%,삼자검측결과구유흔고적부합솔.결론성공구건료정형간염병독항원중조표체질립(pRSETB-HDAg),재원핵세포획득은정고효표체,EIA 검측증명HDAg항원성호,가용우조장HDV진단시제,용우림상정형간염환자적진단화아국정형간염병독감염류행병학적조사.
